紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)\ND2000分光光度計(jì)是NanoDrop的產(chǎn)品,應(yīng)用液體的表面張力特性,樣品體積只需要 0.5~2ul,在檢測(cè)臺(tái)上,經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù),并在*廣受歡迎,其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)\ND2000分光光度計(jì)使用高能量氙燈(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光譜檢測(cè),且不需要暖機(jī),開(kāi)機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測(cè)器,檢測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs(dsDNA濃度2~15000ng/ul),大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測(cè)。
待測(cè)樣品的均質(zhì)性是的zui高要求,一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測(cè)前以vortex mixer震勻?yàn)?,若無(wú)vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂,則改以55?C加熱約一分鐘,使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài),以確保 2ul 具有代表性。
檢測(cè)時(shí)選擇不同檢測(cè)模式,可以得到zui快速的結(jié)果:
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
● UV-Vis – 190~840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜(以1mm光徑吸收值呈現(xiàn))。
● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì),須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)(mass extinction coefficient)方可計(jì)算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果,自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square,待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。
* 蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見(jiàn)定量呈色劑,因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深,使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書(shū)并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,在*時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線zui多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品zui多可做五重復(fù)。
* 測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul,每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes 低塵擦拭紙(編號(hào): 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。
濃度范圍:
樣品種類 | zui低濃度 | zui高濃度 (超過(guò)時(shí)請(qǐng)稀釋樣品) | 再現(xiàn)性 (五重復(fù)以上) |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) | 濃度范圍在 2-100 ng/ul 時(shí),SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時(shí),CV為 ± 2% |
純BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時(shí),SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時(shí),CV為 ± 2% |
蛋白質(zhì),以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測(cè)的濃度范圍內(nèi)皆然) |
蛋白質(zhì),以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測(cè)的濃度范圍內(nèi)皆然) |
蛋白質(zhì),以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 濃度范圍在 100-500 ug/ml 時(shí),SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時(shí),CV為 ± 5% |
蛋白質(zhì),以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 濃度范圍在 15-50 ug/ml 時(shí),SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時(shí),CV為 ± 5% |
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