大鼠抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA Kit 

Elisa試劑盒說明：

1．檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

2．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。

3．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

4．試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時)。

5．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

該Elisa試劑盒可檢測樣本：血液標本，組織液標本，尿液標本，糞便標本，腦脊液標本，胸腹水標本等(具體詳細情況請咨詢)

Elisa試劑盒操作步驟(具體操作以說明書為準)：

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標記抗體工作液 100μl(取1μl*標記抗體加99μl*標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。 

4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同*標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

注：

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 

3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、*標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。