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超分辨率顯微鏡平臺(tái)LiveCodim是一個(gè)通用的超分辨率成像平臺(tái)，具有任何標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡使用的接口。它是高分辨率、低光毒性的活體成像解決方案。
超分辨率顯微鏡平臺(tái)應(yīng)用
超分辨率顯微鏡平臺(tái)建立了一種新的超分辨率成像模式，為SR在細(xì)胞生物學(xué)中的主要關(guān)鍵挑戰(zhàn)提供了答案：保持生物樣品的完整性、技術(shù)復(fù)雜性。
超分辨率顯微鏡平臺(tái)包含一個(gè)通用的附加組件，用于任何標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡。它包括寬視場(chǎng)、共焦和超分辨率模式，以提供一個(gè)完整的解決方案，特別適合改裝。
這項(xiàng)技術(shù)基于獲得的錐形衍射顯微鏡（CODIM）強(qiáng)大的光束整形器，能產(chǎn)生可控的和局部的光模式，用于掃描光毒性非常低、光漂白可以忽略的生物樣品。

超分辨率顯微鏡平臺(tái)工作步驟
步：
在共焦顯微鏡上設(shè)置定期實(shí)時(shí)觀察，并優(yōu)化圖像采集設(shè)置。
第二步：
將所需區(qū)域放置在整個(gè)視野的中心，并執(zhí)行5倍共焦放大。
第三步：
選擇要在超分辨率模式下成像的感興趣區(qū)域，并定義CODIM采集設(shè)置。
第四步：
啟動(dòng)CODIM超分辨率采集，然后在共焦窗口中確認(rèn)結(jié)果。
第五步：
反復(fù)重復(fù)這個(gè)過(guò)程，檢查多個(gè)區(qū)域。
超分辨率顯微鏡平臺(tái)優(yōu)勢(shì)
•高性能超分辨率多色成像| 4個(gè)熒光通道
•分辨率更好或等于120 NM XY |使用光結(jié)構(gòu)和掃描點(diǎn)方法提高分辨率
•活體細(xì)胞成像?低光毒性和低光漂白使體內(nèi)SR研究成為可能
•穿透深度?Z疊加能力和“抑制”來(lái)自其他平面的信號(hào)
•標(biāo)準(zhǔn)樣品制備?標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡樣品制備流程
•與所有熒光顯微鏡無(wú)縫集成
•精簡(jiǎn)易用的應(yīng)用?自主處理算法，無(wú)需用戶調(diào)整多個(gè)參數(shù)

超分辨率顯微鏡平臺(tái)技術(shù)
錐形衍射光束整形器
2006年，gabriely.Sirat證明了錐形衍射可以作為一種實(shí)用的光束整形工具，并建議創(chuàng)建一種多功能的光束整形器，并將其應(yīng)用于超分辨熒光顯微鏡。薄雙軸晶體將規(guī)則入射光束的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)（PSF）轉(zhuǎn)化為一系列廣泛的光分布，分布的選擇由輸入和輸出偏振控制。
實(shí)際上，光束整形是通過(guò)在可控偏振器之間封閉雙軸晶體來(lái)實(shí)現(xiàn)的；這種簡(jiǎn)單的光學(xué)裝置，類(lèi)似于偏振計(jì)，能夠在微秒甚至更快的時(shí)間內(nèi)從一種模式切換到另一種具有不同拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的模式。此外，這些圖案是共局域化的，因?yàn)樗鼈兪怯上嗤闹鞴馐a(chǎn)生的。
利用CODIM實(shí)現(xiàn)超分辨率
CODIM光束整形器被用作共焦模塊的附加組件，并在樣品上掃描分布，為每個(gè)掃描點(diǎn)產(chǎn)生幾個(gè)顯微圖像。由于點(diǎn)掃描的幾何結(jié)構(gòu)，我們的系統(tǒng)創(chuàng)建了一個(gè)減少的漫射光數(shù)量相比，基于廣域技術(shù)。
CODIM光束整形器使用錐形衍射原理產(chǎn)生緊湊的局部光分布。每個(gè)顯微圖像包含大量的高頻，接近阿貝極限（與艾里模式相比，高達(dá)3倍）（圖4）。
投影在樣品上的這些光分布是使用復(fù)雜的專(zhuān)有算法進(jìn)行分析的。這允許重建超分辨率圖像，對(duì)于一般物體，分辨率提高到2倍。此外，這些算法，利用正約束和稀疏性，允許分辨率進(jìn)一步提高，為足夠的樣本。
最終，低得多的峰值功率分布、高量子產(chǎn)率相機(jī)的使用以及更長(zhǎng)的相機(jī)曝光時(shí)間的結(jié)合，大大降低了發(fā)送到樣品的光的峰值功率和能量。這就是這種方法光漂白和光毒性很低的原因。這也避免了熒光團(tuán)飽和的問(wèn)題，使該方法線性和定量。