AAA-DirectTM氨基酸分析系統(tǒng)分析氨基酸Z直接的方法
Thermo氨基酸分析儀技術(shù)參數(shù)
1.自動進(jìn)樣器容量:49x10ml,100x1.5ml
2.GP50泵 zui大壓力:5000psi
3.泵頭和流路適用于pH4-14的淋洗液和反向淋洗液。
4.脈沖積分安培檢測器
Thermo氨基酸分析儀主要特點
1.一次進(jìn)樣50分鐘內(nèi)完成分析。
2.可同時完成22種氨基酸和碳水化合物的分析
3.安培檢測,檢出限較茚三酮法高數(shù)十倍
4.無需柱前柱后衍生,直接陰離子交換分離
5.流動相簡單氫氧化鈉/醋酸鈉無需有機溶劑
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介紹 AAA-DirectTM 分析氨基酸zui直接的方法
戴安公司AAA-Direct氨基酸分析儀掀起了氨基酸分析*的一次重大革新,與現(xiàn)存的方法不同,氨基酸不需要任何柱前柱后衍生,通過積分脈沖安培檢測器(IPAD)被直接檢測,而且具有相當(dāng)高的靈敏度,該系統(tǒng)采用了戴安公司為氨基酸的高分辨分離專門設(shè)計的的2mm直徑的微孔陰離子交換柱Dionex AminoPacTMPA10.
直接檢測技術(shù)的簡便性,使其能廣泛運用于蛋白的鑒定和食品分析,另外,AAA-Direct系統(tǒng)具有*的優(yōu)點,可以用于在線的控制和過程的優(yōu)化,如:大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)液和發(fā)酵液. 檢測方法 通過IPAD直接檢測一級和二級氨基酸.不需要柱前或柱后衍生. 采用適用于氨基酸分析的AAA-Certified金電極.
分離方法 氨基酸和氨基糖高分辨分離. 陰離子交換分離*消除了基體影響. 一次進(jìn)樣氨基酸和碳水化合物同時出峰. 性能 高靈敏度-檢出限可達(dá)pmol, 至少比茚三酮方法高出50倍. 對于大部分氨基酸, 檢測器響應(yīng)的線性超過三個數(shù)量級 可靠的定量分析-所測數(shù)據(jù)與陽離子交換/茚三酮氨基酸分析方法所測的數(shù)據(jù)*吻合.
可以直接了當(dāng)?shù)貦z測尚很難檢測的氨基酸,如:*,半*,*,蛋氨酸和磷酸氨基酸. 對于如膠原蛋白之類的復(fù)雜蛋白樣品來說,是一種更快速、更便捷的方法. 樣品前處理簡單. 可以適用于任何常用的水解過程,如6M HCI, 4M甲基磺酸(MSA),過甲酸氧化/6M HCI,以及4.2M NaOH.
系統(tǒng)配置 高效四元梯度微孔泵和自動脫氣系統(tǒng)提供流路和組分控制,淋洗液消耗量低 整個系統(tǒng)的零部件及流路由惰性的,無金屬的PEEK材料組成,可以耐腐蝕性的淋洗液和緩沖液 柱溫箱內(nèi)可以放置兩根柱子,檢測池和進(jìn)樣閥. 選配的樣品準(zhǔn)備裝置使得某些操作自動化,如:準(zhǔn)備多點校正標(biāo)樣時的單一或系列稀釋,標(biāo)準(zhǔn)曲線自動產(chǎn)生.
經(jīng)濟而且操作方便 AAA-Direct氨基酸分析儀選用2mm微孔系統(tǒng),淋洗液消耗量低,這樣使操作更便利,更節(jié)約時間.IPAD的直接檢測,免除了費時的樣品衍生過程及昂貴的試劑消耗.在AAA-Direet系統(tǒng)中,不再需要麻煩的柱后衍生泵系統(tǒng)和很貴的試劑,樣品只需稀釋和過濾,圖1所示為100pmol標(biāo)樣的典型譜圖.
*保留時間和檢測響應(yīng)值 對氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液及諸如細(xì)胞培養(yǎng)液,發(fā)酵液和蛋白水解液等實際樣品的分析已證明了,該系統(tǒng)具有優(yōu)異的檢測器響應(yīng)和保留時間穩(wěn)定性.圖2所示是氨基酸標(biāo)準(zhǔn)混合液連續(xù)進(jìn)樣100次以上檢測器響應(yīng)值.圖3和圖4分別為細(xì)胞培養(yǎng)液介質(zhì)進(jìn)樣100次以上保留時間和檢測器響應(yīng)的重現(xiàn)性.
穩(wěn)定可靠的分析柱技術(shù) AminoPac PA10微孔柱是專門用于氨基酸分離的選擇性高效陰離子交換柱.與以往的離子交換柱相比,這種柱子有很多優(yōu)點: 梯度淋洗后快速再平衡. 優(yōu)異的傳質(zhì)特征,分離效果好. 耐酸堿(PH范圍:0-14) 機械穩(wěn)定性(4000psi)和化學(xué)穩(wěn)定性高,延長柱子壽命.
復(fù)雜基質(zhì)進(jìn)樣后,可以用常規(guī)有機溶劑快速清洗 常用的梯度程序 圖5所示為分離22種常見氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)三元梯度.(水,0..25M氫氧化鈉,1.0M醋酸鈉).如果有特殊應(yīng)用,梯度程序可以自由設(shè)定. 適用于所有標(biāo)準(zhǔn)水解過程 四種常用的水解過程,如6M HCI, 4M MSA,過甲酸氧化/6M HCI和4.2M NaOH,都適用于AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng).另外,由于色譜保留機理是離子交換,AminoPac PA10對中性樣品組分沒有保留,這樣就*消除了基體的影響.
簡化*測定 *在常用的HCI水解過程中會分解,影響測定結(jié)果.而NaOH水解過程在柱前、柱后衍生分析方法中又比較麻煩,因為水解產(chǎn)物必須經(jīng)中和、稀釋。
因此在陽離子交換/茚三酮方法中勢必會消耗大量樣品.另外,在衍生過程中產(chǎn)生的大量NaC1干擾,也是個問題.在AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng)中,因為用NaOH作為淋洗液,*經(jīng)NaOH后可直接進(jìn)樣分析。樣品的準(zhǔn)備非常簡單,不需中和反應(yīng)。進(jìn)樣前只需進(jìn)行水解產(chǎn)物的稀釋和過濾 同時測定氨基酸,氨基糖和碳水化合物 蛋白水解物中通常存在氨基糖。
AminoPac PA10對氨基糖亦有很好的響應(yīng),因此在測定氨基酸的同時可測定氨基糖(見圖6)。 生化工業(yè)中,AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng)已經(jīng)以實驗和在線方式被用于發(fā)酵池和大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)液中氨基酸和氨基糖的直接監(jiān)控.這就為蛋白和肽治療過程中氨基酸和碳水營養(yǎng)物的監(jiān)控提供了更簡便的方法. 圖7所示為細(xì)胞培養(yǎng)液的分析結(jié)果.插圖為分析中所用IPAD的波形,圖中藍(lán)線為積分階段.采用此波形,能同時測定樣品中常見的氨基糖和氨基酸.如果積分階段移向更低的電壓,羥氨基酸的影響被抑制.同一樣品中的碳水化合物和羥基氨基酸能被選擇性地檢測.
所示是大腸桿菌發(fā)酵液隨時間變化的一系列譜圖的疊加.各種氨基酸隨時間的變化一目了然.這對生產(chǎn)過程的*化非常有利,因為基本氨基酸的量可以根據(jù)需要簡便地控制和調(diào)整. 蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物 運用AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng),已經(jīng)成功地分析了包括膠原蛋白在內(nèi)的各種蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物.檢驗數(shù)據(jù)與柱后茚三酮分析法的結(jié)果*一致.圖9所示為膠原蛋白水解物的色譜圖.尤其值得一提的是,所有氨基酸的定量只需一次進(jìn)樣. 食品和飲料分析 該系統(tǒng)已經(jīng)用于多種食品和飲料樣品的分析.
包括未加工和加工過的肉類水解物,果汁和蔬菜汁,啤酒和紅酒.圖10所示為多種不同的未加工肉類經(jīng)過MSA水解后的分析譜圖.圖11所示為紅酒中的游離氨基酸測定結(jié)果.樣品前處理非常簡單,因為IPAD的靈敏度非常高,允許樣品稀釋1000倍,甚至更高. 訂貨指南 氨基酸直接分析儀有四種不同的系統(tǒng)配置,適用于不同的氨基酸分析。系統(tǒng)1是基本配置;系統(tǒng)2包括了樣品配置器,可自動配置(多種水平)校正標(biāo)準(zhǔn);系統(tǒng)3和系統(tǒng)4則另外包括了樣品冷卻裝置 標(biāo)準(zhǔn)配置 每臺AAA-Direct系統(tǒng)包括: 帶有真空脫氣的微孔PEEK GP50泵 P/N 054045 ED40檢測器(包括PH參比電極) P/N044094 微孔管道配件箱 P/N052324
淋洗液組織器:1個調(diào)節(jié)器 4個2L塑料瓶 P/N 054468 系統(tǒng)1 帶有AS50自動進(jìn)樣器和加熱室的AAA-Direct分析儀 除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外,還包括AS50全自動選擇PEEK自動進(jìn)樣器和加熱室;用于AS50的氨基酸金電極安培池;1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包) 系統(tǒng)2 帶有AS50自動進(jìn)樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇的AAA-Direct分析儀 除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外,還包括AS50全自動選擇PEEK自動進(jìn)樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇,用于AS50的氨基酸金電極安培池;1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包) 系統(tǒng)3 帶有LC25和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀 除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外,還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500;LC25色譜柱箱;用于LC25的氨基酸金電極安培池;1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包) 系統(tǒng)4 帶有LC30和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀 除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外,還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500;LC30色譜柱箱;
用于LC30的氨基酸金電極安培池;1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包) 用AAA-Direct直接分析系統(tǒng)進(jìn)行氨基酸確定,必須配備金電極電化學(xué)池,PeakNet工作站、AminoPac PA10分析柱及保護(hù)柱均需另外訂貨。
附加部件 AminoPac PA10分析柱 (2X250mm) P/N55406 AminoPac PA10保護(hù)柱 (2X50mm) P/N55407 用于AS50的氨基酸金電極安培池 P/N55826 用于LC25的氨基酸金電極安培池 P/N55827 用于LC30的氨基酸金電極安培池 P/N55828 氨基酸金工作電極 P/N55832 DX-LAN泵卡 P/N044195 檢測卡 P/N044196 PeakNet控制WindowsNT工作站 P/N054464 技術(shù)指標(biāo) 柱子 尺寸: AminoPac PA10分析柱: 2X250mm AminoPac PA10保護(hù)柱: 2X50mm zui大工作壓力:4000Psi 流動相兼容性:pH 0-14;0-100% HPLC溶劑 樹脂粒子參數(shù) 基球直徑:8.5um 微孔尺寸:< 10Å 交聯(lián)度:( %DVB ):<55% 膠乳參數(shù) 官能團:烷基季胺鹽離子 膠乳交聯(lián)度:1%
膠乳尺寸:80nm 疏水性:疏水 重量:60 微克當(dāng)量(分離柱) 12 微克當(dāng)量(保護(hù)柱) 柱結(jié)構(gòu):PEEK材料 所有部件由非金屬組成 GP50 技術(shù)指標(biāo) AS50自動進(jìn)樣器技術(shù)指標(biāo) 適用性:梯度和等度分離構(gòu)造:化學(xué)惰性,無金屬污染的peek材料;泵頭和流路適用于pH值為0-14的淋洗液和反相淋洗液。類型:雙重往復(fù)式柱塞微處理器控制連續(xù)沖程,可變流速控制方式:手動或通過繼電器遙控TTL或PeakNet軟件泵頭體積:25µL死體積(無混合器):
<300µLzui大承受壓力:35MPa(5000psi)壓力報警限值:超出上限35 MPa(5000psi)一個單位;低于設(shè)定下限一個單位;流速準(zhǔn)確度:設(shè)定值的±0.5%或0.2µL/min流速精密度:小于0.2%流速范圍:0.01-2.50mL/min淋洗液選擇:四種不同的流動相成分,任何一種所占比例為0-100%比例準(zhǔn)確度:±2%壓力波動:系統(tǒng)壓力的2.0%(系統(tǒng)有壓力狀態(tài)下) 樣品容量:49×10mL; 100×1.5mL樣品瓶大小:10mL和1.5mL帶裁切好瓶墊的樣品瓶每個樣品瓶可進(jìn)樣次數(shù):1-99次zui小進(jìn)樣體積:在100µL微型進(jìn)樣瓶中可從5µL樣品中采集1µL,在300µL微型進(jìn)樣瓶中可采集10µL,在10mL微型進(jìn)樣瓶中可從500µL樣品中采集20µL可變的體積范圍:1-100µL有0.1µL的增加,100-1000µL有1µL的增加注射閥:帶Tefzel轉(zhuǎn)子封口的Peek Rheodyne 閥進(jìn)樣環(huán)體積:標(biāo)準(zhǔn)的25µL進(jìn)樣環(huán)及其它大小的進(jìn)樣環(huán)進(jìn)樣精度:固定式的樣品環(huán),進(jìn)樣量為20µL 時<0.3%的偏差,變化式的樣品環(huán),>0.5%的偏差稀釋精密度:1:100稀釋時為1.0%的偏差配置精密度:重量法,<0.2%的偏差轉(zhuǎn)移法,500µL的沖洗體積時誤差<0.01%環(huán)境溫度范圍:10-40℃濕度范圍:10-90%相對濕度,無冷凝電壓:90-265V, 47-63和Hz 功率:可在300-600瓦間選擇尺寸大小:64×30×46cm(26×12×19inch)重量:<30kg (<65lb)加熱箱和色譜箱技術(shù)指標(biāo)大?。?0×17.5×40cm(20×7×16inch)重量:色譜箱:9kg(20lb)加熱箱:18kg(40lb)加熱箱溫度控制范圍:10-40℃,偏差為±0.2℃環(huán)境操作溫度:20-40℃溫度穩(wěn)定性:±0.2℃溫度準(zhǔn)確度:±0.1℃加熱和冷卻速率:環(huán)境溫度為20℃時,在5min內(nèi)可從20℃升至40℃在10min內(nèi)可從40℃降至20℃死體積:zui小值<100µL安全性:漏液傳感器和足夠的漏液處理能力,液體溢出閥樣品預(yù)備項技術(shù)指標(biāo)稀釋精度:1:100稀釋時,面積偏差小于1.0%(包括稀釋和進(jìn)樣)配置準(zhǔn)確度:重量法為0.2%