microRNA Isolation Kit——分離miRNA或靶mRNA

近年來，microRNA(miRNA)成為生命科學和醫(yī)學領域的明星。雖然只有22個左右的堿基，但是在基因表達調控中起著至關重要的作用，參與細胞分化、個體發(fā)育，且與多種疾病相關。因此對于miRNA的研究越來越多。傳統的miRNA分離方法是結合了基于酚/胍的樣品裂解和硅膠膜離心柱，直接將總RNA分離出來，不能直接分離出miRNA。
Wako的miRNA純化試劑盒能夠制備高純度的miRNA片段，在細胞中，成熟的miRNA分子可與Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默復合體(RISC)，此純化試劑盒利用免疫沉淀方法，與Ago蛋白結合抗體的特異性，分離miRNA。純化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。與傳統的miRNA純化方法相比，有效提高了miRNA的克隆效率。純化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。
n  特點
1)      內源性Ago蛋白的免疫沉淀
2)      高度純化與Ago蛋白結合的miRNA
3)      其他RNAs的污染少，比如rRNA & tRNA
4)      純化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微陣列
5)      可同時分離miRNA和靶mRNA，便于直接進行后續(xù)的靶mRNA的克隆和定量分析
 

與常規(guī)方法比較

使用例1：
圖1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2純化microRNA片段
從培養(yǎng)的人類細胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中純化的microRNA片段用Urea-PAGE和銀染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）檢測。每個細胞系的數目大約是5×106。上樣量是用該試劑盒純化后獲得的5ul microRNA溶液（制備的溶液一般是10ul）。

  siRNA藥理研究
將小分子干擾RNA（siRNA）直接注入細胞中，這些siRNA結合蛋白元件，也可形成RISC，此試劑盒也可純化與Ago2結合的siRNA，便于后續(xù)的siRNA研究分析。因此此試劑盒不僅能分離miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓寬了試劑盒的使用范圍。
 
后續(xù)研究：
1）RNAi的抑制效果
2）siRNA的藥代過程
3）體內siRNA的穩(wěn)定性
4）毒性/副作用
5）對于非特異性mRNAs的脫靶效應

 
貨號               品名                                              規(guī)格
 291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests      
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests    
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2     10tests    
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests  
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests    
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                  200units   
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                          500units  
298-67901 PCR Purification Kit            30tests 
298-68001 Target mRNA Cloning Kit            10tests

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