PCR檢測實驗室布局要求:
PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為了避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
1.試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
該實驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。
2.標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、儲存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
3.擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測定中,通常在1輪擴增后必須打開反應(yīng)管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓,以避免氣溶膠在本區(qū)漏出,為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行。
4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設(shè)。
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PCR檢測實驗室 規(guī)劃 建造
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