豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA試劑盒
取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
強(qiáng)力振蕩3分鐘
用Whatman 濾紙過濾
取25µl處理后的樣品,加入25µl*于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)
酶免分析步驟
實(shí)驗(yàn)須知
實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。
使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存
請(qǐng)不要改變分析程序
請(qǐng)使用精確的微量移液器
操作一旦開始,請(qǐng)不要中斷任何程序
ELISA結(jié)果的可重復(fù)性*程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
分析步驟
預(yù)*行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,*進(jìn)行雙孔檢測. 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(10×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
在所有孔中加入50µl的抗總*抗體酶結(jié)合物
輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。
37℃溫浴30min (溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)
甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
反應(yīng)洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻
37℃溫浴10min
每孔中加入50µl終止液,混勻
在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
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