大鼠線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV（正鐵*-氧化還原酶）ELISA Kit
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操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品 100µl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50µl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取 100µl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl棄掉，再各取 50µl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50µl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液 50µl，混勻后從第九第十孔中各取 50µl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50µl，
濃度分別為 150 pg/mL，100 pg/mL ，50 pg/mL，25pg/mL，12.5 pg/mL）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
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