小鼠纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒
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操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標
準品 100µl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50µl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取 100µl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl棄掉,再各取 50µl分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取 50µl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl,混
勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液 50µl,混勻后從第九第十孔中各取 50µl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50µl,
濃度分別為 150 pg/mL,100 pg/mL ,50 pg/mL,25pg/mL,12.5 pg/mL)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30(48T的 20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的 20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
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