*G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒
Elisa的操作步驟及要點(diǎn)
(一)操作步驟
1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1~10μg /孔,每孔加200μl,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16~18小時(shí)。
2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200μl,37℃放置一小時(shí)。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200μl。同時(shí)作稀釋液對(duì)照。37℃放置2小時(shí)。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200μl, 放置37℃ 1小時(shí)。
8. 洗滌同2。
9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液:每孔50μl。
11. 觀察結(jié)果:用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄490nm讀數(shù)。
(二)操作要點(diǎn)
優(yōu)質(zhì)的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證 ELISA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式 ELISA 各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn),珠式、管式及磁性球 ELSIA,國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,兩者均有詳細(xì)的使用說明,嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。
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