植物乙烯(ETH)ELISA試劑盒
優(yōu)質(zhì)的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。
1.標本的采取和保存
大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
抗凝不*的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1~2小時,產(chǎn)物的生成可達。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。
4.洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%~0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應(yīng)按要求稀釋,所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm之下,洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40秒左右,孔內(nèi)液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。
5.顯色和比色
TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12~24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準確性為±1%,重復(fù)性達0.5%,酶標儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15~30分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測讀A值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA板的位置,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚*千份標本,因此,也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,
可概括四個方面:
1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
Elisa試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。指標齊全elisa試劑盒供給科研單位實驗研究,高校發(fā)布文獻,可提供免費代檢測,一周出數(shù)據(jù),公司具有國內(nèi)外的技術(shù)水平,更好的售后服務(wù)和優(yōu)質(zhì)的解決方案,為您提供高品質(zhì)高服務(wù)高創(chuàng)新的產(chǎn)品。
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