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北京大學(xué)團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)熒光偶極子三維取向映射顯微技術(shù)

2024-05-16 08:34:42來(lái)源:北京大學(xué) 閱讀量:48 評(píng)論

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導(dǎo)讀:3DOM方法基于團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的偏振結(jié)構(gòu)光超分辨顯微技術(shù),把楊氏雙縫干涉的原理反過(guò)來(lái),結(jié)合光路可逆的原理,利用不同角度的條紋產(chǎn)生不同方向的正負(fù)一級(jí)光束。

  由于細(xì)胞的高度透明性,觀察其中的細(xì)胞器十分困難。通過(guò)熒光染色,生物學(xué)家可以標(biāo)記特定的細(xì)胞器對(duì)其進(jìn)行觀察。絕大部分熒光分子在吸收或發(fā)射過(guò)程中,表現(xiàn)為有方向的偶極子。通過(guò)熒光偏振顯微鏡測(cè)量偶極子特性,能夠反映靶分子的取向特性,從而為研究靶分子的空間構(gòu)象和運(yùn)動(dòng)特性提供重要信息。
 
  為了打破傳統(tǒng)熒光偏振顯微鏡受光學(xué)衍射限制的問(wèn)題,諸多超分辨熒光偏振顯微鏡技術(shù)被提出,如單分子定向定位顯微鏡(SMOLM)和偏振調(diào)制技術(shù)(SDOM、SPoD等)。然而,SMOLM在追求高空間分辨率的同時(shí)犧牲了時(shí)間分辨率,使得快速生物成像成為一項(xiàng)艱巨的挑戰(zhàn)。SDOM等偏振調(diào)制技術(shù)雖具有較高的時(shí)空分辨率,但只能求解偶極子的二維取向,缺乏解析偶極子三維取向的能力。三維取向能夠提供熒光分子更全面的三維空間結(jié)構(gòu),因此,關(guān)鍵問(wèn)題是如何打破時(shí)空分辨率和取向維度之間的權(quán)衡,實(shí)現(xiàn)超過(guò)衍射極限分辨率的同時(shí),能夠快速成像和解析偶極子的三維方向。
 
  針對(duì)偶極子取向解析問(wèn)題,北京大學(xué)未來(lái)技術(shù)學(xué)院席鵬教授團(tuán)隊(duì)繼2016年提出二維偶極子取向映射方法SDOM(Light.: Sci. Appl., 2016),及2022年基于光學(xué)鎖相探測(cè)的二維取向映射方法OLID-SDOM(Light.: Sci. Appl., 2022)后,為打破時(shí)空分辨率和三維取向維度的權(quán)衡瓶頸,開(kāi)發(fā)了新型的三維取向映射顯微鏡(3DOM)。相關(guān)研究成果以“Three-dimensional dipole orientation mapping with high temporal-spatial resolution”為題,于2024年4月16日在線(xiàn)發(fā)表在PhotoniX期刊。
 
  3DOM方法基于團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的偏振結(jié)構(gòu)光超分辨顯微技術(shù),把楊氏雙縫干涉的原理反過(guò)來(lái),結(jié)合光路可逆的原理,利用不同角度的條紋產(chǎn)生不同方向的正負(fù)一級(jí)光束。進(jìn)一步,只需要把相應(yīng)的負(fù)一級(jí)次光擋住,就可以產(chǎn)生單一方向的傾斜照明。把這一傾斜投影到z軸不同的角度,利用FISTA算法對(duì)圖像進(jìn)行重建,在倒易空間結(jié)合偏振調(diào)制系數(shù)和重建結(jié)果,即可實(shí)現(xiàn)高精度的偶極子取向解析。
 
圖1 三維取向映射顯微鏡原理圖
 
圖2 SYTOX Orange標(biāo)記λ-DNA的3DOM成像結(jié)果
 
  研究結(jié)果表明,3DOM方法有效地克服了偏振熒光顯微鏡在使用寬場(chǎng)成像進(jìn)行高時(shí)空分辨率和三維方向映射方面的局限性,提供了更全面的熒光團(tuán)分子的三維空間結(jié)構(gòu)。這不僅能夠應(yīng)用于區(qū)分DNA、膜細(xì)胞器以及各種細(xì)胞骨架組織的宏觀形態(tài)(肌動(dòng)蛋白絲和微管),而且還可以獲得結(jié)構(gòu)的有序性和結(jié)合緊密度等有價(jià)值的信息。此外,3DOM的主要優(yōu)點(diǎn)之一是它易于在現(xiàn)有的寬場(chǎng)系統(tǒng)中升級(jí),適用范圍廣,這增強(qiáng)了其在不同研究環(huán)境中的可及性和可用性??梢灶A(yù)見(jiàn)未來(lái)3DOM這個(gè)強(qiáng)大的工具將會(huì)有助于研究人員解析復(fù)雜的細(xì)胞器結(jié)構(gòu),推動(dòng)對(duì)眾多生物結(jié)構(gòu)和納米級(jí)相互作用的理解,為結(jié)構(gòu)生物學(xué)家、生物動(dòng)力學(xué)家?guī)?lái)新的觀察工具。
 
  席鵬和生命科學(xué)學(xué)院李美琪老師為本文的共同通訊作者。北京大學(xué)未來(lái)技術(shù)學(xué)院博士生鐘素藝為該項(xiàng)成果的第一作者。該研究得到了科技部國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、國(guó)家自然科學(xué)基金等項(xiàng)目的支持。
 
  席鵬課題組致力于發(fā)展新型超分辨顯微成像技術(shù),在偏振超分辨方面開(kāi)展了如下工作:(1)利用偏振偶極子解析實(shí)現(xiàn)了50nm的超分辨與熒光二維偶極子測(cè)量(Light: Science and Applications 2016 ); (2)通過(guò)解析結(jié)構(gòu)光超分辨中的偏振信息,實(shí)現(xiàn)了偏振SIM超分辨(Nature Communications 2019),并成功實(shí)現(xiàn)商業(yè)化;(3)結(jié)合熒光分子的化學(xué)極性(光譜紅移)與物理序性(偶極子自由度)信息,成功實(shí)現(xiàn)了10種細(xì)胞器的同時(shí)觀察與環(huán)境研究(Nature Communications 2020);(4)通過(guò)偏振調(diào)制和光學(xué)鎖定放大技術(shù)來(lái)增強(qiáng)微弱的偏振調(diào)制信號(hào),實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的熒光各向異性的高靈敏度測(cè)量(Light: Science and Applications 2022);(5)發(fā)展了具有偶極子方位解析能力的3D-SIM開(kāi)源軟件Open-3DSIM(Nature Methods 2023 )和開(kāi)源硬件(Advanced Photonics Nexus 2024);(6)對(duì)相關(guān)的SIM重建算法進(jìn)行了系統(tǒng)綜述(Light: Science and Applications 2023) 。
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