戴安離子色譜儀的原理是輸液泵將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送到分析系統(tǒng)中。在色譜柱之前,樣品將被引入樣品注射器。流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱,分離柱內(nèi)各成分,然后與流動(dòng)相依次流向檢測器。在抑制型離子色譜法中,在電導(dǎo)檢測器前增加一個(gè)抑制系統(tǒng),即用另一個(gè)高壓輸液泵將再生液輸送至抑制器。在抑制器中,降低流動(dòng)相的背景電導(dǎo)率,然后將流出物引入電導(dǎo)率檢測單元,并將檢測到的信號發(fā)送給數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行記錄、處理或保存。
離子色譜法是一種高效液相色譜法,又稱高效離子色譜法或現(xiàn)代離子色譜法。與傳統(tǒng)的離子交換色譜柱色譜不同,樹脂交聯(lián)度高,交換容量低,進(jìn)樣量小。采用柱塞泵輸送洗脫液時(shí),通常對洗脫液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)率檢測。
戴安離子色譜儀可用于檢測糖:
水中常見糖類的pKa值??梢?,常見單糖、雙糖和糖醇的pKa值一般在L2~14之間,常見的糖醛酸和糖胺的pKa值小于7。當(dāng)堿性溶液的pH值大于或等于L2時(shí),大多數(shù)糖基化物以陰離子的形式存在,因此陰離子交換色譜柱可作為洗脫液分離強(qiáng)堿性溶液。
由于糖分子結(jié)構(gòu)中的疏水部分,糖的分離機(jī)理不僅是陰離子交換,而且是疏水吸附。糖類化合物在陰離子交換柱上的保留容量主要取決于其電荷數(shù)、分子大小、組成和結(jié)構(gòu)。
安培檢測是一種在適當(dāng)?shù)耐饧与娢幌?,測量電化學(xué)活性物質(zhì)發(fā)生氧化或還原反應(yīng)時(shí)電流變化的檢測技術(shù)。糖的分離是在堿性條件下完成的,而金電極的檢測條件通常是堿性的,金電極表面可以為糖的電化學(xué)氧化提供反應(yīng)環(huán)境。因此,金電極的檢測與陰離子交換分離有很好的匹配性。由于糖的氧化產(chǎn)物會(huì)覆蓋電極表面,造成不可逆的污染,因此需要選擇不同的外加電位對電極表面進(jìn)行清洗和活化,使電極能夠連續(xù)工作,即脈沖安培檢測。
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