Cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)-微量移液器說明

Cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)

-微量移液器說明

Cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)配置的顯微鏡的物鏡裝有微量移液器固定裝置（CellSorter），將毛細(xì)管保持在樣品上方的光軸上?？梢允褂眉?xì)螺紋相對于物鏡手動提升或降低毛細(xì)管。
通過這種手動調(diào)整，我們將由白色LED照明的毛細(xì)管的定位在物鏡的焦平面上，其精度受到物鏡景深的限制。
此后，將毛細(xì)管相對于物鏡固定并由顯微鏡聚焦驅(qū)動器控制。
平行于光軸的微量移液器的定位精度由物鏡的景深（3.9 mm）和精細(xì)聚焦旋鈕決定。 當(dāng)微量移液器接近表面小于10 mm時，分選分辨率更好。

對于流體控制，Cellsorter熒光激活高速自動細(xì)胞分選系統(tǒng)使用了一個高速電磁液體閥（AL3112，Asco），該閥連接到一個由注射泵（NE-1000，New Era Pump Systems）控制的50 ml注射器上。該電磁閥的標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)時間為5毫秒。
根據(jù)我們的測試結(jié)果，短的可重復(fù)打開狀態(tài)的周期為8 ms。我們在分選實驗中使用此參數(shù)值操作閥門。
通過在恒定溫度下將空氣的初始體積V0（對應(yīng)于環(huán)境壓力p0）增加到內(nèi)部V來調(diào)節(jié)注射器中的真空，從而獲得終壓力。保持一定的壓力差，比可能的管道彈性變形和在幾個拾取動作中從皮氏培養(yǎng)皿中吸出的液體量高幾個數(shù)量級，以確保在分選實驗期間注射器中的真空恒定。

當(dāng)拾取50個以上的細(xì)胞時，我們通過以50次拾取操作從培養(yǎng)皿中提取的液體的估計總體積（通常為50毫升）來增加其體積，從而補償了注射泵中的真空損失。

我們將檢測到細(xì)胞后的分選過程的持續(xù)時間限制在15分鐘以內(nèi)，因為活動細(xì)胞會依次離開其初始位置，從而導(dǎo)致微量移液器的定位不正確。

每次實驗后，我們通過用微量移液管吸去離子水和96％的乙醇來清洗整個流體控制系統(tǒng)，以避免污染。

微量移液器可在多個實驗中重復(fù)使用而不會發(fā)生堵塞。從培養(yǎng)皿中取出的微量移液器中的培養(yǎng)基干燥會導(dǎo)致堵塞，通常可以用水溶解。微量移液器可在多個實驗中重復(fù)使用而不會發(fā)生堵塞。