Cellsorter高速自動細胞分選-揀選活細胞的真空度選擇

Cellsorter高速自動細胞分選

-揀選活細胞的真空度選擇

我們使用三種不同的哺乳動物細胞類型和兩種不同的熒光標記測試了該技術(shù)的分選效率：
正常3T3小鼠成纖維細胞與親脂性熒光染料DiI染色的同種細胞混合；
NE-4C神經(jīng)外胚層小鼠干細胞與表達綠色熒光蛋白（GFP）的NE-GFP-4C細胞混合；
用GFP標記的小膠質(zhì)細胞對小鼠星形膠質(zhì)細胞進行原代培養(yǎng)。

我們需要在表面固定細胞以應(yīng)用該技術(shù)。我們發(fā)現(xiàn)，一旦細胞粘附強度得到優(yōu)化，所有三種細胞類型都可以通過微量移液器輕松分類。操作的真空值可以簡單地計算為注射器中的實驗可控真空度減去2,000 Pa的靜水壓力（當注射器保持比細胞低0.2 m時）。由于伯努利定律，細胞位置處流體流動中的實際真空可能與這些值不同。（有關(guān)更多詳細信息，請參見“流場測量”部分。）
弱粘附的NE-4C細胞易于在中等真空度下拾取。當細胞*粘附后，即使接種1天后仍達到26,000 Pa。盡管小膠質(zhì)細胞更牢固地粘附于表面，但接種后1d可以使用220,000 Pa 的真空將其拾取，并且如MTT細胞活力測試所示，可以恢復活細胞。我們使用3T3和NE-4C細胞對細胞存活率進行了定量。為了獲得存活的3T3細胞，我們在接種后1小時使用212,000 Pa 的真空對它們進行了分類。在溫育期間，大多數(shù)3T3細胞發(fā)展出穩(wěn)定但不牢固的附著于表面。