Cellsorter高速自動細胞分選-細胞之間應(yīng)該保持多少距離

Cellsorter高速自動細胞分選

-細胞之間應(yīng)該保持多少距離

圖片

分選前后細胞培養(yǎng)物的相差和熒光圖像。

（a，b，c，d）NE-4C細胞，（e，f，g，h）3T3細胞，（i，j，k，l）星形膠質(zhì)細胞-小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)物。
（a，c，e，g，i，k）在揀選之前的圖像（b，d，f，h，j，l）在揀選之后的圖像
在（d，h，l）的插圖中示出了起作用的微量移液器的孔。

GFP標記了一部分NE-4C細胞和所有小膠質(zhì)細胞。部分3T3細胞用DiI染色。分選過程去除了軟件檢測到的這些熒光細胞。用白框表示在分選之前在相差和熒光圖像中檢測到的細胞。

（c）中細胞之間的直線顯示了微量移液器的路徑：由于與鄰居的距離比分液器的內(nèi)徑小得多，而相鄰的單元格的分選分辨率小于50 mm，因此排除了路徑外的三個細胞的分選。我們不需要在相差圖像中檢測星形膠質(zhì)細胞（i），因為GFP標記的小膠質(zhì)細胞甚至可以從緊密附著的星形膠質(zhì)細胞的非常近的位置去除，而不會干擾它們。（i）中的框顯示在面板k中檢測到的小膠質(zhì)細胞。比例尺：100um。

系統(tǒng)對真空進行調(diào)整并通過注射泵進行了優(yōu)化，并且可以拾取至少90％的每種細胞。分選分辨率，即兩個細胞之間可選擇性去除的小距離為50-70微米，與我們在特定實驗中使用的微量移液器孔相同?？梢酝ㄟ^軟件排除在分選解決方案中帶有鄰居的標記細胞。在15分鐘內(nèi)從培養(yǎng)皿中收集的大細胞數(shù)約為1,000，終受到每秒1個細胞的分選速度的限制。排序速率由軟件到硬件的通信延遲確定。估計用于定位的優(yōu)化硬件控制每秒可接收10個以上的單元。為了測試其他類型的細胞，我們還分選了HaCat人類角質(zhì)形成細胞，HEK 293人類胚胎腎細胞。