Cellsorter高速自動細胞分選-挑選細胞后的成活率分析

Cellsorter高速自動細胞分選

-挑選細胞后的成活率

分選后，將熒光細胞注入并在新的培養(yǎng)皿中進一步培養(yǎng)。NE-4C和3T3細胞在新培養(yǎng)皿中顯然具有活力并增殖，從而導致無標記細胞的熒光細胞單培養(yǎng)。由于基于細胞形態(tài)的小膠質細胞的生存能力并不直接，因此我們完成了MTT測試。根據(jù)分類后的還原能力，大多數(shù)小膠質細胞是可行的。

為了量化該技術的分類效率和細胞存活率，我們使用了未標記的3T3和NE-4C細胞。在初步實驗中，我們在自動檢測細胞后，用孔徑為62 mm的微型移液器吸取了數(shù)百個3T3細胞，真空度為12,000 Pa。我們發(fā)現(xiàn)增加的真空度不會改變細胞存活率。我們還進行了實驗，以調查從CD1小鼠制備的原代神經(jīng)膠質培養(yǎng)物的存活率。用*-EDTA對細胞進行3分鐘的預處理，在選擇分選并提取細胞的實驗中，其存活率為100％。

為了比較分選后的細胞與未分選但通過PDMS表面經(jīng)過新培養(yǎng)皿的細胞的存活力，采用*-EDTA的常規(guī)方法，我們測量了正常傳代后的存活率，如``細胞存活率測定''一節(jié)中所述'。

短暫（30-60 s）*-EDTA處理后，我們在顯微鏡的相差模式下捕獲的培養(yǎng)圖像中手動標記了3-5個細胞。我們調整了連接到微量移液器的注射器的真空度，該注射器的孔徑為69 mm，并自動拾取細胞。0真空表示注射器中的環(huán)境壓力。然后將細胞注射到置于新皮氏培養(yǎng)皿中間的克隆圓筒中，以簡化隨后的細胞搜索。2小時后，我們在新培養(yǎng)皿中計數(shù)了活細胞。拾取效率計算為拾取的選定單元格數(shù)與所有選定單元格數(shù)之比。平均拾取效率為93 63T3和NE-4C分別為4％和100％。在一些實驗中，微量移液器從選擇進行分選的細胞附近收集了額外的細胞。這些單元的數(shù)量在“拾取的單元數(shù)”列中的1信號之后顯示。未選擇進行排序的單元格的拾取率是該數(shù)量與所有選定單元格數(shù)量的比率。3T3和NE-4C 的未選擇細胞的平均拾取率分別為11 6 12％和6 6 6％。將存活率計算為存活的細胞數(shù)與拾取的細胞數(shù)之比，包括未選擇的細胞。平均生存率為66 6 12％和88 63T3和NE-4C分別為16％。將平均比率計算為樣本平均數(shù)加權的每個比率的分母，即輸入單元格的數(shù)量。通過加權樣本方差除以實驗次數(shù)的平方根來近似均值誤差