采用安捷倫 6470三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)測(cè)定食用油中的辣椒素類(lèi)成分

摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 液相色譜和 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)測(cè)定食用油中的 3 種辣椒素類(lèi)成分。該方法與中國(guó)食品藥品檢定研究院頒布的 BJS 201801《食用油脂中辣椒素的測(cè)定》保持一致，并對(duì)樣品前處理過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化，簡(jiǎn)化了操作步驟。所考察的 3 種辣椒素類(lèi)成分的檢測(cè)限為 5–10 pg/mL，*原補(bǔ)充檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)限要求。

前言：“地溝油”泛指各種劣質(zhì)油脂，包括泔水油、煎炸老油、劣質(zhì)動(dòng)物內(nèi)臟或皮脂的煉制油、食品及相關(guān)企業(yè)產(chǎn)生的廢棄油脂等，其中來(lái)自餐飲業(yè)的泔水油是地溝油的主要來(lái)源之一。辣椒是餐飲業(yè)中用量較大的調(diào)料，使用范圍遍布全國(guó)各地。辣椒中的辣味成分主要是*，其具有脂溶性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、沸點(diǎn)高等特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，天然*由 14 種辣椒素同系物組成，其中辣椒素和二氫辣椒素的總含量占*的 90% 以上。合成辣椒素由人工合成得到，由于其價(jià)格和辣度與天然辣椒素相比具有優(yōu)勢(shì)，因此廣泛應(yīng)用于食品添加劑和餐飲行業(yè)中。通常情況下，正常的食用油基本不含*，而接觸過(guò)辣椒的餐廚廢棄油脂中難以避免地含有這類(lèi)成分，而目前的地溝油加工工藝很難*去除脂溶性強(qiáng)的*物質(zhì)。因此可將含量較高的天然辣椒素、二氫辣椒素和合成辣椒素（結(jié)構(gòu)式如圖 1 所示）作為鑒別餐飲廢棄油脂的特征指標(biāo)。

2012 年 8 月，由大連化物所和重慶起草的《食用植物油中*成分的液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)方法及其在“地溝油”識(shí)別中的應(yīng)用》[1] 為質(zhì)譜鑒別地溝油開(kāi)創(chuàng)了先河。其后中國(guó)食品藥品檢定研究院將《食用油脂中辣椒素的測(cè)定 BJS 201801》[2] 作為食用油檢測(cè)過(guò)程中的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。這兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)均以天然辣椒素、二氫辣椒素和合成辣椒素作為鑒別地溝油的特征指標(biāo)。

本文使用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 液相系統(tǒng)和 安捷倫6470 三重四極桿系統(tǒng)對(duì) 3 種特征指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，并建立了相應(yīng)的樣品前處理流程。

實(shí)驗(yàn)部分：試劑和樣品所有標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自 Accustandards 公司 (New Haven, CT, USA)。質(zhì)譜所用純甲酸和乙腈購(gòu)自 Merck 公司 (Kenilworth, USA)。水由 Milli-Q 超純水系統(tǒng)制得。儀器和設(shè)備 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 液相色譜系統(tǒng)，配備如下安捷倫組件： G7120A 二元泵、G7167B 自動(dòng)液體進(jìn)樣器、G7116B 柱溫箱和 G7117B 二極管陣列檢測(cè)器。所用質(zhì)譜儀為 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。標(biāo)樣前處理用甲醇將 3 種標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液稀釋成 5 pg/mL–100 ng/mL 的校準(zhǔn)標(biāo)樣，儲(chǔ)存在棕色樣品瓶中。樣品前處理準(zhǔn)確稱(chēng)取 0.5 g 樣品加入 10 mL 具塞塑料試管中，加入 1 mL 二氯甲烷，再加入 3 mL 2% 氫氧化鈉溶液；渦旋提取 10 min，以 4000 r/min 離心 10 min，取上層水相；再用 3 mL 2% 氫氧化鈉溶液將殘留有機(jī)相重復(fù)提取一次，合并水相。 Agilent Bond Elut Plexa PAX 小柱預(yù)先用 3 mL 乙腈淋洗 3 次，再用 3 mL 純水淋洗 2 次進(jìn)行平衡；然后將上述水相提取液加入小柱，控制流速至每秒 1–2 滴，待全部溶液通過(guò) SPE 小柱后，以 3 mL 超純水淋洗 2 次，棄去流出液；終以 3 mL 的 5% 甲酸乙腈洗脫 2 次。用 50 °C 氮?dú)鈱⒁译嫦疵撘捍抵两?，?0.5 mL 甲醇溶解后，通過(guò)微孔濾膜（0.22 μm，有機(jī)相）進(jìn)行過(guò)濾。并將濾液置于樣品瓶?jī)?nèi)襯管中，以供 LC-MS/MS 測(cè)定。

液相條件色譜柱： Agilent Eclipse Plus-C18, 2.1 × 50 mm, 1.8 μm 柱溫： 40 ºC 進(jìn)樣體積： 2 μL 流動(dòng)相： A) 0.1% 甲酸水溶液 B) 0.1% 甲酸乙腈溶液運(yùn)行時(shí)間： 10 min 流速： 0.3 mL/min 梯度程序： T (min) B (%) 0 25 1 25 4 95 6 95 質(zhì)譜條件鞘氣溫度： 400 °C 鞘氣流速： 12 L/min 干燥氣溫度： 300 °C 干燥氣流速： 8 L/min 霧化器壓力： 40 psi 毛細(xì)管電壓： 3000 V 噴嘴電壓： 0 V Delta EMV： 300 V MRM 離子對(duì)： 如表 1

結(jié)論：本文使用 Agilent 1290 Infinity Ⅱ 液相色譜和 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)食用油中的 3 種辣椒素類(lèi)化合物進(jìn)行了測(cè)定。UHPLC 色譜分析只需 6 分鐘，靈敏度是 BJS 201801《食用油脂中辣椒素的測(cè)定》補(bǔ)充檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法的 10–20 倍。并對(duì)樣品前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，簡(jiǎn)化了操作步驟，完*夠滿(mǎn)足實(shí)際樣品的測(cè)試需求。