在 Agilent InfinityLab 色譜柱上分析有機(jī)酸

摘要 ：Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱在 4 分鐘內(nèi)分離出 10 種有機(jī)酸。色 譜柱規(guī)格為 2.1 × 100 mm，2.7 µm 表面多孔顆粒填料。使用磷酸鹽緩沖液和乙腈流 動相進(jìn)行等度洗脫，在 Agilent 1290 Infinity 液相色譜儀上完成分離。

前言 ：表面多孔顆粒填料液相色譜柱是液相色譜 領(lǐng)域常用的工具。與對應(yīng)的全多孔顆粒色 譜柱相比，這種色譜柱能夠在較低壓力下 獲得較高柱效。這主要是由于該色譜柱的 傳質(zhì)距離更短并且填料顆粒的粒徑分布明 顯更窄。更高的柱效能夠明顯提高分離 度和靈敏度，加快分析速度并改善分析 結(jié)果。 表面多孔顆粒填料主要用于反相分離。 隨著表面多孔顆粒填料的成熟，該項(xiàng)技 術(shù)越來越多地運(yùn)用于化學(xué)鍵合相和其他 色譜技術(shù)中，例如親水相互作用液相色 譜 (HILIC)。HILIC 非常適合極性分析物的 分析，這種分析物通常很難在反相模式 下實(shí)現(xiàn)保留和分離。本應(yīng)用簡報(bào)展示了 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z, 2.7 µm 色譜柱的 UHPLC 性能及其對 10 種有機(jī)酸的基線分離能力。圖 1 列出了 這些化合物。

 實(shí)驗(yàn)部分 ：本研究采用低擴(kuò)散配置的 Agilent 1290 Infinity 液相色譜儀。表 1 列出具體信 息。表 2 列出所用的色譜方法信息。將 所有化合物的標(biāo)準(zhǔn)品單獨(dú)進(jìn)樣，表 3 列 出了濃度和樣品溶劑。

所分析的 10 種有機(jī)酸購自 SigmaAldrich。磷酸鈉和磷酸同樣來自 SigmaAldrich。乙腈購自 Honeywell (Burdick and Jackson)。水經(jīng) Milli-Q 系統(tǒng) (Millipore) 0.2 µm 濾膜過濾，分子量為 18。 重要事項(xiàng)：磷酸鹽在乙腈含量高的溶液中 溶解度較低，并可能在磷酸鹽緩沖液與乙 腈混合時(shí)發(fā)生沉淀。因此，通常不建議將 磷酸鹽用于 HILIC 分析。然而，為了能用 二極管陣列檢測器在低波長處對有機(jī)酸進(jìn) 行充分檢測，磷酸鹽*，因?yàn)榧姿?鹽和乙酸鹽會產(chǎn)生明顯的基線噪音。為防 止鹽在液相色譜系統(tǒng)中沉淀，強(qiáng)烈建議 按表 2 中的詳細(xì)說明對流動相進(jìn)行預(yù)混 合。應(yīng)檢查預(yù)混合流動相，并定期監(jiān)測鹽 的沉淀情況。配制流動相時(shí)，如鹽或乙腈 的用量超過本應(yīng)用簡報(bào)中的規(guī)定量，會導(dǎo) 致出現(xiàn)鹽沉淀。如需流動相選擇更靈活， 請使用兼容甲酸鹽或醋酸鹽緩沖液的替代 檢測器（如 MSD、ELSD 或 RID）。使用 這些緩沖液可能會導(dǎo)致選擇性發(fā)生變化， 因此需要額外的方法開發(fā)。

 結(jié)果與討論 ：圖 2 中的色譜圖顯示，10 種有機(jī)酸在 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱上得到了基線分離。分離在 4 分鐘 內(nèi)完成，所有化合物均達(dá)到了基線分離。 在 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 鍵 合相中，采用一種新型兩性離子固定相 與穩(wěn)定的雜化顆粒發(fā)生鍵合，可在高達(dá) 80 °C 和 pH 12 的條件下保持穩(wěn)定。這種 鍵合相為帶電化合物提供了出色的峰形， 并能在較大的極性范圍內(nèi)分離分析物。 HILIC-Z 鍵合相的上述特征使其非常適合 在具有挑戰(zhàn)性的中等 pH 條件下分離有 機(jī)酸。

結(jié)論 ：Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱提供了一種穩(wěn)定的有機(jī)酸分離方 法。這款色譜柱為所有化合物均實(shí)現(xiàn)良好 的分離度和峰形。