使用天然產(chǎn)物整體解決方案比較不同廠家*口服液中化學成分的異同

背景介紹：中國的傳統(tǒng)醫(yī)藥既復雜又神奇，發(fā)展已有幾千年的歷史。但*以來，如何判斷中藥質(zhì)量的真、偽、優(yōu)、劣缺乏系統(tǒng)、科學的分析方法。比如對不同產(chǎn)地中藥材有效成份的控制，對不同栽培方式、不同采摘季節(jié)或不同加工炮制工藝后中藥材的質(zhì)量評價等一直沒有統(tǒng)一有效的方法。近幾年來，藥學工作者在中藥質(zhì)量標準研究方面做了不少工作，積累了不少寶貴的經(jīng)驗和方法。但總體來說，中藥二元比較工作耗時、成本高，甚至有的方法缺少一定的科學依據(jù)，不夠充分、客觀。該應(yīng)用紀要采用*的分離檢測技術(shù)結(jié)合全新的UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案對此類應(yīng)用提出了有效解決問題的思路。不同產(chǎn)地藥材化學成分的異同、不同廠家同一產(chǎn)品的差異、同一廠家不同批次間產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性等都需要對類似樣品進行比較，觀其成分異同，進而找出差異，為后期的研究提供明確的指導方向。隨著分析儀器技術(shù)的不斷進化，高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀器（比如UPLC/QTof MS）的使用在逐步推廣。高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀器可使樣品的分析時間縮短、分離效率提高，同時還有適應(yīng)性、專屬性高、檢測限低、進樣量小、溶劑消耗少、自動化程度高、定性能力高等特點，在中藥質(zhì)量標準控制的地位也會越來越高。

本應(yīng)用紀要以兩個不同廠家的*口服液產(chǎn)品對比作為應(yīng)用實例向大家闡述新的沃特世UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案。該解決方案以沃特世超高效液相色譜（ACQUITY UPLC ® I-Class），四級桿飛行時間質(zhì)譜（Xevo ® G2-S QTof MS）以及UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫為基礎(chǔ)，采用UNIFI二元比較工作流程對類似的樣品進行比較，迅速找出差異，為后期的質(zhì)量監(jiān)控和制定相關(guān)的質(zhì)量標準提供依據(jù)，從而大大提高了工作效率，并降低了對操作人員技術(shù)背景的要求。

實驗條件樣品處理取*口服液200 μl溶解于2 mL H2O中（相當于稀釋十倍），備用。進樣體積為1 μl。液相色譜條件儀器： ACQUITY UPLC I-Class with FTN Sample Manger 色譜柱： ACQUITY UPLC HSS T3， 2.1×100 mm 1.8 μm，40 ℃ 樣品室溫度： 15 ℃ 流動相A： 水 （0.1% 甲酸）流動相B： 乙腈梯度：時間 （流速 溶劑A 溶劑B 曲線 mL/min） （%） （%） 0 0.5 95 5 開始 1 0.5 90 10 6 8 0.5 55 45 6 12 0.5 45 55 6 13 0.5 5 95 6 15 0.5 95 5 1 質(zhì)譜條件儀器： Xevo G2-S QTof MS 采集質(zhì)量范圍： 100-1500 Da 掃描時間： 0.1 S 采集模式： ESI+和ESI-分辨率模式，MS E Lock mass： *腦啡肽（LE）1 ppm （0.3 S掃描，間隔：15 S）毛細管電壓： 3 KV（ESI+）/ 2.5 KV（ESI-）錐孔電壓： 100 V 碰撞能量（eV）： low CE：6 / High CE：20-45 電離源溫度： 120 ℃ 脫溶劑溫度： 500 ℃ 錐孔氣流速： 60 L/h 脫溶劑氣流速： 1000 L/h 數(shù)據(jù)采集時間： 15 min

*口服液的主要藥材來源為金銀花、黃芩及連翹，具有疏風解表，清熱解毒的功效。對于上呼吸道感染、扁桃體炎、咽炎、病毒性肺炎等細菌和病毒感染性疾病有一定療效。其中*、連翹苷、漢黃芩素是其主要活性成分。中國有很多廠家都生產(chǎn)該口服液產(chǎn)品。故我們借此極有代表性的實例來闡述UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案中二元比較的工作流程（圖1）。

結(jié)果：采用超高效液相色譜與四級桿飛行時間質(zhì)譜對兩個不同廠家*口服液的相關(guān)化學成分進行數(shù)據(jù)采集。采用UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案中二元比較工作流程并結(jié)合UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果明確顯示了兩個樣品中相同組分圖，差異組分圖以及每個樣品的*組分列表。兩個廠家樣品二元比較的結(jié)果顯示廠家一的口服液中連翹酯苷 A、連翹酯苷B、右旋羥基連翹酯苷A、牛蒡苷、蘆丁等的含量遠高于廠家二的口服液，而廠家二口服液中*含量則較高。

討論： UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案包括ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜、Xevo G2-S QTof四級桿飛行時間質(zhì)譜以及含中藥數(shù)據(jù)庫的UNIFI軟件平臺。該解決方案中包含了五個預設(shè)的二元比較工作流程模板及一個結(jié)果報告模版，使數(shù)據(jù)的采集與處理、數(shù)據(jù)庫檢索、結(jié)構(gòu)確認以及打印報告全部自動化。圖2是不同廠家*口服液的UPLC/QTof MS基峰離子色譜對比圖（BPI）。此圖顯示了采用超高效液相色譜分析復雜中藥體系的優(yōu)勢，運行時間短（有效分離時間為12 min），且分離效率與峰容量皆高。同時，四級桿飛行時間質(zhì)譜又提供了質(zhì)量信息的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。除此之外，從圖2中可初步看出不僅這兩個生產(chǎn)廠家的化學成分復雜，而且口服液成分大多類似，如果不借助有效軟件的幫助從成分如此復雜的兩個樣品中快速準確找出其共性與差異幾乎是不可能的。

 
天然產(chǎn)物研究無論是單一樣品組分定性還是不同樣品的組分比較, 明確組分的詳細信息是進一步進行其他研究的基礎(chǔ)。對已知藥材樣品成分分析的工作流程已在應(yīng)用紀要“采用UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案鑒定綠茶提取物中的化學成分（部件編號：720004837ZH）”有詳細闡述。我們依此工作流程，從UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫中導入與金銀花、黃芩、連翹中藥材有關(guān)的所有化學成分，然后進行數(shù)據(jù)處理，并對樣品中的組分信息進行鑒定。點擊任何一個預設(shè)的二元比較模板，便可得到與之相關(guān)的結(jié)果信息。比如，圖3便顯示了點擊二元比較概況總覽模板（BinaryOverview Plot）所得到的結(jié)果信息。