組織病理切片以及HE染色

組織病理切片以及HE染色 

（一）實驗原理：蘇木素-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能較好地顯示組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)，可用于觀察、描述正常和病變組織的形態(tài)學(xué)，而且HE切片可較長時間保存，被稱為常規(guī)染色方法。

（二）實驗步驟： 一、制作切片 

1、取材、固定：取小鼠腎臟組織適當大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 

2、組織的脫水、透明、浸蠟與包埋 

組織固定后還需經(jīng)過脫水、透明、浸蠟等過程才能制成蠟塊，進行石蠟切片。脫水是指用某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程。組織脫水后，必須經(jīng)過一種既能與酒精相混合又能溶解石蠟的溶劑，通過這種溶劑的媒介作用，使石蠟浸入組織塊。在此過程中，因組織塊中的水分被溶劑所取代，組織塊變得透亮，因此稱之為透明。組織染色后也要進行透明。zui常用的透明劑為二甲苯，處理時間為30min左右。

組織經(jīng)透明后在溶化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱浸蠟。用其他浸透劑（如火棉膠、碳蠟和明膠等）滲入組織內(nèi)部的過程稱為浸透或透入。為使石蠟充分滲入組織塊中，常需經(jīng)過3小時的浸漬，期間需更換3次石蠟。一般用于浸蠟的石蠟熔點為52-56℃。 

組織塊經(jīng)過浸蠟或浸透，用包埋劑（石蠟、火棉膠、碳蠟和樹脂等）包起的過程稱包埋，包埋后便制成含組織的塊。這種包埋塊可使組織達到一定的硬度和韌度，有利于切成薄片。石蠟包埋是病理日常工作中zui常用的包埋方法。用于包埋的石蠟熔點一般為60℃左右。但在有些情況下，如某些酶染色時，則需采用低溫石蠟包埋，以保存組織內(nèi)酶的活性。 3、切片、制片 

石蠟切片常用的切片機有輪轉(zhuǎn)式切片機和*，以前者為多用。切片厚度一般為3-5μm。切片時先將組織片平攤于一塊玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使組織片*展開，再移入40℃恒溫?zé)崴髦小Ｒ部芍苯訉⒔M織切片移入40℃的恒溫?zé)崴髦?，待組織片*展開后將其貼附于載玻片上，經(jīng)56-60℃烤片30-60min后即可進行染色。 

二、HE染色

1. 二甲苯脫蠟2×10 min； 

2. 無水乙醇洗去二甲苯2×5min； 

3. 95％、80％乙醇各l0 min，自來水洗l min（不要讓急水直接沖至載玻片上的組織），蒸餾水洗1min； 

4. 蘇木素染色4 min，自來水洗2 min； 

5. 1％鹽酸酒精分化20 s（鏡下控制），自來水洗2 min； 

6. 1％稀氨水返藍30s（鏡下控制），自來水洗2分鐘，蒸餾水洗1min； 

7. 伊紅染色90s； 

8. 80％乙醇脫水10s，95％酒精10s，無水乙醇5min； 

9. 無水乙醇10min； 

10.二甲苯2×10 min； 

11.中性樹膠或加拿大樹膠封片。 

（三）實驗結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞漿、肌肉、結(jié)締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色。 

（四）實驗分析：HE染色時病理學(xué)中常用的一種診斷方法，通常將病理切片染色后再在顯微鏡下觀察組織的病理學(xué)變化，從而做出病理學(xué)診斷。