祿米-PCR移動(dòng)核酸檢測實(shí)驗(yàn)室案例剖析

一、PCR實(shí)驗(yàn)室概況：

實(shí)驗(yàn)室面積：100平米

承制單位：廣州祿米實(shí)驗(yàn)室設(shè)備科技有限公司

二、實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)內(nèi)容：

核酸檢測;

要求按照第二類病原微生物進(jìn)行管理。病毒培養(yǎng)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)應(yīng)在生物安全三級及以上實(shí)驗(yàn)室開展;未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作應(yīng)在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù);滅活材料的操作應(yīng)在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。病毒核酸檢測應(yīng)當(dāng)在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)。

三、平面布局

四、工作流程

試劑準(zhǔn)備---樣本準(zhǔn)備---擴(kuò)增及產(chǎn)物分析

試劑準(zhǔn)備區(qū)：

PCR實(shí)驗(yàn)室中為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對照。

所有實(shí)驗(yàn)用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準(zhǔn)備處。

商品試劑盒：75%乙醇、焦碳酸二乙酯(DEPC)處理水、NaOH等可能需要自配

自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測時(shí)，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。

儀器設(shè)備主要有加樣器、天平、離心機(jī)和冰箱。

標(biāo)本制備區(qū)：

儀器設(shè)備主要有生物安全柜、超凈臺、加樣器、高速臺式(冷凍)離心機(jī)、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室門口等易受人員走動(dòng)影響的地方，也不應(yīng)直對分體式空調(diào)。

主要是用于核酸樣本的提取，標(biāo)本的制備應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，可防止標(biāo)本氣溶膠的擴(kuò)散。

加樣器吸頭須帶濾芯。

使用加熱模塊時(shí)，如在模塊孔中填入二氧化硅細(xì)砂，然后將標(biāo)本管置于細(xì)砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。

擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：

擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和提取核酸的加入，可在標(biāo)本制備區(qū)也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行，

加樣時(shí)，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個(gè)即蓋好蓋子，然后加陽性質(zhì)控核酸模板，再就是標(biāo)本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴(kuò)增陰性質(zhì)控，這樣做的目的是，較大可能地測出以前擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。

產(chǎn)物分析區(qū)是臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的后一個(gè)工作區(qū)域，也是需要打開擴(kuò)增后反應(yīng)管進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物分析檢測的地方。是PCR實(shí)驗(yàn)室“不潔凈”的區(qū)域。

儀器設(shè)備有、熒光定量PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、測序儀、(酶標(biāo)儀和洗板機(jī))、核酸雜交儀、恒溫設(shè)備等。

五、環(huán)境控制

1、實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)全排風(fēng)的系統(tǒng)，根據(jù)客戶需求配置直膨機(jī)或普通空調(diào)系統(tǒng)，其換氣次數(shù)大于15次/小時(shí)，，室內(nèi)溫度為18~26度，濕度小于75%，噪音<60dB(A);

2、室內(nèi)壓力為整體負(fù)壓，單向氣流;送排風(fēng)形式為上送，下回。

3、氣流組織示意如下：

4、壓差自控控制系統(tǒng)

壓差值：

試劑準(zhǔn)備緩沖間 +10pa

試劑準(zhǔn)備間 +15pa

標(biāo)本制備間緩沖 +5pa

標(biāo)本制備間 -5pa

擴(kuò)增及產(chǎn)物分析緩沖-5pa

擴(kuò)增及產(chǎn)物分析 -15pa

以上壓差自控調(diào)節(jié)。

六、三廢處理

1、廢氣排放：高效過濾排風(fēng)系統(tǒng)采用《 高效空氣過濾器》GB13554

2、廢水排放：經(jīng)過污水處理設(shè)備廢水排放符合《水污染綜合排放標(biāo)準(zhǔn)DB11-307-2013>

3、醫(yī)療固廢：獨(dú)立污物傳遞窗傳至室外，第三方具有醫(yī)療廢物回收資質(zhì)公司回收處理。

七、設(shè)計(jì)依據(jù)

• 《病毒感染的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》

• 《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法2010》

• 《GB 50346-2011 生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》

• 《GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》

• 《GB50849-2014：傳染病醫(yī)院建筑設(shè)計(jì)規(guī)范》

• 《T/CECS662-2020醫(yī)學(xué)生物安全二級實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》

• 《GB/T35428-2017：醫(yī)院負(fù)壓隔離病房環(huán)境控制要求》

• 《WS 233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》

• 《病毒感染的肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》

• 《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法2010》

• 《GB 50346-2011 生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》

• 《GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》

• 《GB50849-2014：傳染病醫(yī)院建筑設(shè)計(jì)規(guī)范》

• 《T/CECS662-2020醫(yī)學(xué)生物安全二級實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》

• 《GB/T35428-2017：醫(yī)院負(fù)壓隔離病房環(huán)境控制要求》

• 《WS 233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》