蛋白分離色譜與高壓制備液相色譜的異同討論

  快速蛋白液相色譜(FPLC)、中壓液相色譜(MPLC)、低壓液相色譜(LPLC)是近年來從HPLC基礎(chǔ)上發(fā)展的新型色譜技術(shù)，其中FPLC能以極快的速度把復雜混合物分離，可在短時間內(nèi)大量純化樣品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科學研究及藥物生產(chǎn)上使用越來越廣泛。

(1)FPLC與HPLC相同的是：都采用輸液泵、高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和計算機控制等設(shè)備，均具有快速、分辨率高、分離效能高等特點。

(2)FPLC與HPLC不同的是：HPLC的管道系統(tǒng)多采用金屬材料，流動相由往復泵或隔膜泵驅(qū)動，使用高壓，色譜柱內(nèi)徑小，分析精度高，大流速通常不超過20 mL/min(有些制備級HPLC可達300 mL/min)，有時需使用一定濃度的有機溶劑，適用于微量樣本檢測或少量純化制備；FPLC的管道系統(tǒng)是由耐高壓的塑料管組成，流動相多由柱塞式泵驅(qū)動，中低壓，所用色譜柱內(nèi)徑大，流速范圍0～100 mL/min(大流速可達1 000 mL/min)，分析精度沒有HPLC高，只使用常規(guī)無機鹽溶液，適于大規(guī)模純化樣品。

(3)應(yīng)用范圍：HPLC可分析低沸點低相對分子質(zhì)量分子、高沸點中分子、高分子有機化合物(包括極性、非極性)、離子型無機化合物、熱不穩(wěn)定生物分子；FPLC專門用于蛋白質(zhì)、多肽及多核苷酸的分離純化。

    高壓制備系統(tǒng)（HPLC）可以涵蓋FPLC的功能，但是在高鹽的實驗環(huán)境下，泵的選擇就需要非常謹慎，隔膜泵會是一個不錯的選擇。常規(guī)來說流速超過3升以上的部分，PTFE、PFA、玻璃等材質(zhì)就不適合了，還是會需要選擇不銹鋼等材質(zhì)。對于FPLC在系統(tǒng)配置上的選型和生物液相又有所區(qū)別，很多PH、電導等檢測器就無需再配置，而且FPLC所涉及的填料內(nèi)徑較大，柱管的大小選擇，流動相的流速選擇對于整體方案的影響也會比較大。