核酸純化的方法及原理

2022

07-02

19:30:01

 189

來源：化工儀器網(wǎng)

　　核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的*重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。

　　核酸純化的方法及原理如下：

　　一、PC抽提法

　　PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組 DNA 會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點，在 RNA 抽提時獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用 PC 抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提的優(yōu)勢是成本低廉，對實驗條件要求較低，對于經(jīng)費緊張的實驗室較為實用。

　　二、高鹽沉淀法

　　高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會更好一些。

　　三、離心柱法

　　離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其特點是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中，與含有核酸的柱子*是分開的，所以洗滌更*。其致命弱點是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。

　　四、生物磁珠法

　　生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動，從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多*的優(yōu)勢，如：

　　①提取靈敏度高(微量材料即可提取)

　?、诩兓兌雀?*與蛋白鹽等雜質(zhì)分離)

　　③提取產(chǎn)量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)

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