無菌操作的技術和注意事項

1、玻璃器皿的消毒和清潔

⑴新購玻璃器皿的處理新購玻璃器皿應用熱肥皂水洗刷，流水沖洗，再用1%～2%鹽酸溶液浸泡，以除去游離堿，再用水沖洗。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等，經清水洗凈后應注入濃鹽酸少許，慢慢轉動，使鹽酸布滿容器內壁數(shù)分鐘后傾出鹽酸，再用水沖洗。

⑵污染玻璃器皿的處理

①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%shi炭酸浸泡，再煮沸30分鐘，亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產生泡沫，然后用清水沖洗至無肥皂為止。然后用少量蒸餾水沖洗。

②細菌培養(yǎng)用的試管和培養(yǎng)皿可先行集中，用1kg/cm2高壓滅菌15～30分鐘，再用熱水洗滌后，用肥皂洗刷，流水沖洗。

③吸管使用后應集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時，逐支用流水反復沖洗，再用蒸餾水沖洗。

④油蠟沾污的器皿，應單獨滅菌洗滌，先將沾有油污的物質棄去，倒置于吸水紙上，100℃烘干半小時，再用堿水煮沸，肥皂洗滌，流水沖洗。必要時可用二jia苯祛污。

⑤染料沾污的器皿，可先用水沖洗，后用清潔或*洗脫染料，再用清水沖洗。一般染色劑呈堿性，所以不宜用肥皂的堿水洗滌。

⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水沖洗，再用肥皂或弱堿性煮沸，自然冷卻后，流水沖洗。被結核桿菌污染或不易洗凈的玻片，可置于清潔液內浸泡后再沖洗。

2、無菌器材和液體的準備將玻璃器具中的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后，用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，裝入干凈的鋁盒或鐵盒中，于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時，取出備用。對于手術器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，則采用高壓蒸氣滅菌法，即在15磅的條件下，加熱20分鐘。而對于MEM培養(yǎng)液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后使用。

3、在無菌操作過程中，重要的是要保持工作區(qū)的無菌、清潔。因此，在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，并認真洗手和消毒。在操作時，嚴禁喧嘩，嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的*、鑷子等。培養(yǎng)瓶應在超凈臺內操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。對于吸管應先用手拿后1/3處，戴上膠皮乳頭，并用酒精燈燒烤之后再吸液體。

4、常用清潔液的配制法

⑴重鉻suan鉀清潔液：可根據不同需要，選用下列的任何一種濃度。先將重鉻suan鉀溶于水中，再慢慢加入濃硫酸。注意，此時可產生高熱，應防止容器破裂。重鉻suan鉀清潔液除污力強，腐蝕性大，應避免接觸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質，此液應貯存于帶蓋的容器中。如清潔效力較差，可再加入少量重鉻suan鉀及濃硫酸，還可繼續(xù)使用。直到液體變藍綠色，即不能再用。配制重鉻suan鉀清潔液時，宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用

玻璃器皿時，應特別注意防止產生高熱而破裂，切忌用量筒來配制。

⑵磷酸三鈉將其配成5%～10%水溶液，可用于洗滌玻璃器皿上的油污，但經常使用腐蝕玻璃，使器皿表面模糊、毛糙。