人血清白蛋白?HSA的檢測試劑及定量檢測方法

人血清白蛋白的檢測試劑

背景技術(shù)

HSA是一種小分子量、非糖基化、帶負(fù)電荷的 血清蛋白，具有物質(zhì)結(jié)合、運(yùn)輸、抗氧化以及酶活性等多種功能。生理情況下，白蛋白是 細(xì)胞外液中含量多的蛋白質(zhì)，其中血漿白蛋白含量為35~50g/L，約占血漿總蛋白的60%， 遠(yuǎn)高于組織間液中的蛋白含量。白蛋白主要在肝臟合成，但不在肝臟內(nèi)貯存，由肝細(xì)胞直接 分泌到竇狀隙中進(jìn)入血液循環(huán)，半衰期為17~19d，終由肌肉、肝臟和腎臟等降解。

HSA具有協(xié)調(diào)維持血管內(nèi)皮完整性，抗氧化作用，臟器功能保護(hù)，維持膠體滲透壓， HSA還有保護(hù)血細(xì)胞、調(diào)節(jié)凝血、作為氮源為損傷組織修復(fù)提供營養(yǎng)等作用。因此，開發(fā)檢測 迅速，操作簡單，成本低廉的HSA檢測方法具有重要意義。

本發(fā)明提供了一種定量測定生物樣品中白蛋白含量的方法及應(yīng)用，具體為HCAB可 與白蛋白特異性結(jié)合，抑制了扭曲分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，非輻射躍迀減少，從而恢復(fù)熒光， 實(shí)現(xiàn)白蛋白的定量檢測。在生理pH值條件下被激發(fā)后(激發(fā)波長λ Μ= 424 nm)產(chǎn)生穩(wěn)定的 熒光信號(hào)(發(fā)射波長λ_= 560 nm)。其熒光值強(qiáng)度與白蛋白的濃度成正比，根據(jù)檢測到的熒 光值可推算出生物樣品中白蛋白的含量。該方法可用于測定血漿、尿液等多種生物樣品中 白蛋白的絕對含量，同時(shí)還具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、、易于高通量檢測 的優(yōu)勢，并且操作簡單，成本低廉。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例將對本發(fā)明予以進(jìn)一步的說明，但并不因此而限制本發(fā)明。

探針1的合成： 1 · 3mmol的化合物3 (2 ' -羥基苯乙酮）、1 · 2mmol的化合物4溶解在 30mL乙醇中，再向其中滴加4.9mmol氫氧化鉀溶液。攪拌8 h，旋蒸除去溶劑，將剩余固體純 化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑，1: 5，v/v)，得到紅色固體160mg，為探針1，產(chǎn)率為 50%。探針 1 的 1HNMR (400 MHz,CDC13): δ 13.19 (s，1H)，7.91 (d，J = 7.0 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.37-7.49 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85-6.96 (m, 1H), 6.69 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.05 (s, 6H)。

探針HCAB的合成： 將0 · 5mmol的探針1和0 · 5mmol的三乙胺加入到10mL的四氫呋喃中，再將苯甲酰氯(0.6 mmol，混合5mL四氫呋喃)在30分鐘內(nèi)逐滴加入反應(yīng)混合物中，在0°C下攪拌lh，然后升溫至 室溫?cái)嚢柽^夜。旋蒸除去溶劑，剩余固體純化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑，l:3，v/ v)，得到103 mg的固體，為探針HCAB，產(chǎn)率為55%。探針HCAB的1H NMR (400 MHz, CDC13)： δ 8.13 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.35 (m, 6H), 6.94 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.58-6.60 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H); 13CNMR (100 MHz, CDCI3): 191.84， 165.02， 152.06， 148.63， 146.91， 133.51, 133.42, 131.65, 130.42, 130.31, 129.80, 129.29, 128.49, 125.95, 123.40, 122.25, 120.71, 111.71, 40.99; HRMS: m/z calcd for C24H21NO3： 371.1521 and found 371.1522。

探針2的合成： 將0.5mmol的探針1和0.5mmol的三乙胺加入到10mL的四氫呋喃中，再將乙酰氯（0.6 mmol，混合5mL四氫呋喃)在30分鐘內(nèi)逐滴加入反應(yīng)混合物中，在0°C下攪拌lh，然后升溫至 室溫?cái)嚢柽^夜。旋蒸除去溶劑，剩余固體純化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑，1:3，v/ v)，得到82mg的固體為探針2,產(chǎn)率為53%。探針2的1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.56 (m,4H), 7.32 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.22 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCh): 191.85，169.44， 152.15, 148.48, 146.74, 133.16, 130.45, 131.73, 129.74, 125.93, 123.33, 122.20, 120.39, 111.83, 40.10, 21.01. HRMS: m/z calcd for C19H19NO3： 309.1365 and found 309.1372。