飼料中三聚氰胺檢測(cè)的全套解決方案
續(xù)“三鹿奶粉三聚氰胺”事件、“韓偉雞蛋”事件之后，飼料中三聚氰胺檢測(cè)又成為人們關(guān)注的一大焦點(diǎn)，成都廣普科學(xué)儀器有限公司作為國(guó)內(nèi)廠家，參照NY/T 1372-2007《飼料中三聚氰胺的測(cè)定》，又及時(shí)地為您提供飼料中三聚氰胺檢測(cè)的分析方法及*儀器配置在內(nèi)的全套解決方案。
【樣品前處理】
稱取飼料樣品0.40g(精確到0.01g)，置于10mL具塞刻度試管中，加入7mL 1%三氯乙酸，渦旋混勻，超聲提取10min；再加入0.5mL 10%乙酸鋅溶液和0.5mL 10%亞鐵氰化鉀溶液，渦旋混勻，用1%三氯乙酸定容至滿刻度線；樣品經(jīng)10000rpm，離心5min；取5mL上清液作為待凈化液。
依次用3mL 甲醇和5mL 水活化SPE柱；將待凈化液用水稀釋至10mL，轉(zhuǎn)移至固相萃取柱，依次用3mL 水和3mL 甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL 5%氨化甲醇溶液洗脫。整個(gè)過(guò)程控制流速不超過(guò)1mL/min。洗脫液50℃下用氮?dú)獯蹈?，殘留物?mL流動(dòng)相溶解，渦旋混合，過(guò)0.45µm 油系濾膜，供HPLC分析。
【儀器與試劑】
UV100紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器；P100高壓恒流泵；色譜柱溫箱；Elite MSP色譜柱(5µm，I.D.4.6mm×150mm)；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(>99%)；陽(yáng)離子交換固相萃取柱(Thermo Retain-CX, 60mg, 3mL)；氫氧化鈉、檸檬酸(分析純)、辛烷磺酸鈉(色譜純)、甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、乙酸鋅(分析純)、亞鐵氰化鉀(分析純)、三氯乙酸(分析純)、氨水(25%)、超純水(二次過(guò)濾)，各種飼料樣品。
【試劑配制】
① 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
稱取50.0mg(精確到0.1mg)三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用20%甲醇溶解并定容至50mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/L，于4℃冰箱儲(chǔ)存，有效期3個(gè)月。
使用時(shí)，用流動(dòng)相將儲(chǔ)備液分別稀釋到不同濃度即可。標(biāo)準(zhǔn)系列工作曲線包括1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL。
② 1% 三氯乙酸溶液
稱取10.0g三氯乙酸，加水定容到1000mL。
③ 10%乙酸鋅溶液
稱取10.0g乙酸鋅，加水定容到100mL。
④ 10%亞鐵氰化鉀溶液
稱取10.0g亞鐵氰化鉀，加水定容到100mL。
⑤ 氨水甲醇溶液
量取5mL氨水溶液，加入100mL甲醇混合均勻。
【分析方法】
色譜柱：Elite MSP 5µm(ID4.6mm×150mm)
流動(dòng)相：乙腈/緩沖鹽=10/90(緩沖鹽——含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)節(jié)pH至3.0)
流速：1.5mL/min
波長(zhǎng)：240nm
室溫：控制在22~28℃之間
進(jìn)樣量：20µL
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
1. 標(biāo)準(zhǔn)品譜圖
10mg/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)譜圖如下：
圖1 10mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖
2. 重現(xiàn)性
采用此方法分析三聚氰胺，連續(xù)進(jìn)樣重現(xiàn)性良好。
圖2 5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣11次重現(xiàn)性
表1 5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣11次重現(xiàn)性數(shù)據(jù)
| 保留時(shí)間/min | 峰面積/mV·sec | |
| 1 | 14.687 | 207.21 |
| 2 | 14.679 | 206.85 |
| 3 | 14.665 | 206.28 |
| 4 | 14.637 | 205.23 |
| 5 | 14.638 | 206.12 |
| 6 | 14.616 | 206.36 |
| 7 | 14.586 | 207.66 |
| 8 | 14.620 | 207.55 |
| 9 | 14.627 | 207.84 |
| 10 | 14.659 | 207.83 |
| 11 | 14.689 | 207.71 |
| 平均值 | 14.65 | 206.97 |
| RSD/% | 0.23 | 0.42 |
3. 線性相關(guān)性測(cè)試
如圖3、4，在所測(cè)試濃度范圍內(nèi)，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品具有良好的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)均為0.9999。
圖3 不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品疊加譜圖
圖4 實(shí)驗(yàn)的校準(zhǔn)曲線
4. 加標(biāo)回收率
圖5對(duì)比可知，在標(biāo)準(zhǔn)品出峰位置，樣品沒(méi)有明顯出峰，故該樣品為陰性樣品或三聚氰胺含量低于該系統(tǒng)的方法檢出限，用此樣品做加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。
圖5 未知樣品、空白及樣品加標(biāo)疊加譜圖
表2 飼料樣品的加標(biāo)回收率結(jié)果
| 加標(biāo)量(mg/kg) | 平行實(shí)驗(yàn)一 (mg/kg) | 平行實(shí)驗(yàn)二 (mg/kg) | 平均值 (mg/kg) | 回收率% |
| 1.0 | 1.05 | 1.03 | 1.04 | 104.0% |
| 5.0 | 4.36 | 4.51 | 4.44 | 88.8% |
| 10.0 | 9.63 | 9.25 | 9.44 | 94.4% |
| 25.0 | 21.97 | 21.77 | 21.87 | 87.5% |
如表2結(jié)果，在4個(gè)不同的加標(biāo)水平下，該方法三聚氰胺的加標(biāo)回收率在87.5%~104.0%之間，說(shuō)明方法準(zhǔn)確性良好。
5. 檢測(cè)限、定量限
依據(jù)噪聲值，按3倍信噪比，計(jì)算其理論檢出限，按10倍信噪比，計(jì)算其理論定量限如下：
| 計(jì)算方法 | 檢出限(mg/kg) | 定量限(mg/kg) |
| 校正曲線方法 | 0.046 | 0.153 |
6. 系統(tǒng)穩(wěn)定性測(cè)試
同一飼料加標(biāo)樣品，一分為三，采用所述方法連續(xù)處理三次，并測(cè)試譜圖計(jì)算結(jié)果，如圖6和表3所示。
圖6 樣品分析疊加譜圖
表3 平行樣品測(cè)試結(jié)果
| 平行實(shí)驗(yàn)一 (mg/kg) | 平行實(shí)驗(yàn)二 (mg/kg) | 平行實(shí)驗(yàn)三 (mg/kg) | 平均值 (mg/kg) | RSD% |
| 4.36 | 4.51 | 4.42 | 4.43 | 1.47 |
同一樣品，平行測(cè)試3次，測(cè)試三聚氰胺結(jié)果RSD值為1.47%，說(shuō)明該系統(tǒng)穩(wěn)定性良好。
7. 實(shí)際樣品定性和定量結(jié)果
采用所述方法，對(duì)飼料樣品進(jìn)行了分析，譜圖如下，結(jié)果如表4。
表4 飼料實(shí)際樣品測(cè)試結(jié)果
| 樣品編號(hào) | 一 | 二 | 三 | 四 | 五 | 六 | 七 |
| 三聚氰胺含量(mg/kg) | 未檢出 | 未檢出 | 0.63 | 25.07 | 770.47 | 1.41 | 未檢出 |
圖7 飼料樣品一分析譜圖
圖8 飼料樣品二分析譜圖
圖9 飼料樣品三分析譜圖
圖10 飼料樣品四分析譜圖
圖11 飼料樣品五分析譜圖
圖12 飼料樣品六分析譜圖
圖13 飼料樣品七分析譜圖
附件1：HyperSep Retain-CX產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品名稱: HyperSep Retain-CX
填料基質(zhì): 磺酸基功能化的聚苯乙烯/二乙烯基苯萃取柱
規(guī)格型號(hào):60mg/3mL
產(chǎn)品貨號(hào):60107-303
產(chǎn)品圖片:
生產(chǎn)商: Thermo Fisher Scientific
產(chǎn)品特點(diǎn):
l 三聚氰胺前處理
l 堿性、非極性分析物的均可保留
l 從生物樣品中萃取堿性藥物的理想選擇
附2：飼料中三聚氰胺檢測(cè)依利特全套配置清單
測(cè)試用分析方法包
| 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格級(jí)別 | 數(shù)量 | 產(chǎn)地 |
| 1 | 檸檬酸 | 分析純 | 50g | 國(guó)產(chǎn) |
| 2 | 辛烷磺酸鈉 | 色譜純 | 60g | 國(guó)產(chǎn) |
| 3 | 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品 | 純度≥99.0% | 1克 | 美國(guó) |
| 4 | 一次性注射器(200支/包) | 2mL | 1包 | 國(guó)產(chǎn) |
| 5 | 水系濾膜(100片/盒) | φ50mm，0.45μm | 1盒 | 上海 |
| 6 | 有機(jī)系濾膜(100片/盒) | φ50mm，0.45μm | 1盒 | 上海 |
| 7 | 針筒式有機(jī)相過(guò)濾器(100支/包) | φ13mm，0.45μm | 2包 | 天津 |
| 8 | Elite MSP 三聚氰胺柱 | ID:4.6×250mm，5μm | 1支 | 依利特 |
| 9 | 混合型陽(yáng)離子固相萃取柱(50支/盒) | HyperSep Retain-CX，60mg/3mL | 4盒 | 進(jìn)口 |
測(cè)試用前處理配置包
| 序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格級(jí)別 | 數(shù)量 | 產(chǎn)地 |
| 1 | 超聲波水浴 | AS3120型，3L,功率：120W | 1臺(tái) | 天津 |
| 2 | 隔膜真空泵 | GM型 | 1臺(tái) | 天津 |
| 3 | 溶劑過(guò)濾器 | 1000mL | 1套 | 天津 |
| 4 | 分析天平 | AL104，感量0.0001g | 1臺(tái) | 進(jìn)口 |
| JD60-4,0.0001g | 1臺(tái) | 沈陽(yáng) | ||
| 5 | 離心機(jī) | TG16G，16000轉(zhuǎn)，6×50mL | 1臺(tái) | 湖南 |
| TD5G，5000轉(zhuǎn)，12×10mL | 1臺(tái) | 湖南 | ||
| 6 | PH計(jì) | FE20K酸度計(jì) | 1臺(tái) | 進(jìn)口 |
| 6010酸度計(jì) | 1臺(tái) | 上海 | ||
| 7 | 渦旋混合器 | QL-861 | 1臺(tái) | 江蘇 |
| 8 | 固相萃取儀 | SPE-12 | 1套 | 天津 |
| 9 | 氮?dú)獯蹈蓛x | PGC-01D | 1臺(tái) | 天津 |
液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)配置包
| 序號(hào) | 名稱 | 數(shù)量 |
| 1 | LC100三聚氰胺測(cè)試用液相色譜系統(tǒng) | 1套 |
| ⑴P100高壓恒流* | 1臺(tái) | |
| ⑵UV100紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器 | 1臺(tái) | |
| ⑶ZWII型色譜柱恒溫箱 | 1套 | |
| ⑷Rheodyne 7725i 高壓六通進(jìn)樣閥 | 1支 | |
| ⑸Elite MSP 三聚氰胺柱 | 1支 | |
| ⑹25µL微量進(jìn)樣器 | 1支 | |
| ⑺100µL微量進(jìn)樣器 | 1支 | |
| ⑻ZJ-1閥及色譜柱安裝支架 | 1套 | |
| ⑼色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件V1.0版 | 1套 | |
| ⑽工具包 | 1套 | |
| 2 | 高級(jí)配置(更多功能，人性化配置，工作效率更高) | |
| ⑴P1201S柱塞清洗單元 | 1套 | |
| ⑵P1201溶劑管理器(含進(jìn)口二元脫氣機(jī)) | 1套 | |
| ⑶AS230固定體積型自動(dòng)進(jìn)樣器 | 1套 | |
| 3 | 升級(jí)配置(升級(jí)后，可在以后工作中檢測(cè)多種樣品，適用面更廣，節(jié)約成本) | |
| ⑴P1201等度升級(jí)梯度配置包 | 1套 | |
| ⑵AS230可變體積型自動(dòng)進(jìn)樣器 | 1套 | |
備注：如需分析飼料中的三聚氰胺，以上三個(gè)配置包所列儀器、試劑，都需配備，缺一不可。
所有評(píng)論僅代表網(wǎng)友意見(jiàn)，與本站立場(chǎng)無(wú)關(guān)。