Carbomix系列色譜柱專為高效分離制備水溶性或部分水溶性 的有機化合物而設(shè)計,可用于分離糖類、有機酸、多肽和細胞代謝物中的生物有機小分子。Carbomix系列固定相是在低交聯(lián)度(5%、8%和10%)的聚 苯乙烯/二乙烯基苯(PS/DVB)顆粒(5、10 µm)表面鍵合磺酸基團(-SO3H),即為Carbomix H-NP填料;若在此填料上繼續(xù)絡(luò)合不同的離子則形成不同類型的填料。如絡(luò)合離子為鈣離子(Ca2+),則為Carbomix Ca-NP填料;如絡(luò)合離子為鉛離子(Pb2+),則為Carbomix Pb-NP填料;如絡(luò)合離子為鉀離子(K+),則為Carbomix K-NP填料;如絡(luò)合離子為鈉離子(Na+),則為Carbomix Na-NP填料。
5和10 μm Carbomix填料電鏡圖 |
Carbomix色譜柱技術(shù)參數(shù)表
類型 | Carbomix H | Carbomix Ca | Carbomix Pb | Carbomix K | Carbomix Na | ||
基質(zhì) | PS/DVB | PS/DVB | PS/DVB | PS/DVB | PS/DVB | ||
粒徑 (μm) | 5, 10 | 5, 10 | 5, 10 | 5, 10 | 5, 10 | ||
交聯(lián)度 | 5%, 8% and 10% | 5%, 8% and 10% | 5%, 8% and 10% | 5%, 8% and 10% | 5%, 8% and 10% | ||
固定相 | -SO3H | -(SO3)2Ca | -(SO3)2Pb | -SO3K | -SO3Na | ||
pH穩(wěn)定性 | 1 – 3 | 5 – 9 | 5 – 9 | 5 – 9 | 5 – 9 | ||
zui大耐壓 | 10% 交聯(lián)度 | 10 μm | 1,500 | 1,500 | 1,500 | 1,500 | 1,500 |
5 μm | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | ||
8% 交聯(lián)度 | 10 μm | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | |
5 μm | 800 | 800 | 800 | 800 | 800 | ||
5% 交聯(lián)度 | 10 μm | 600 | 600 | 600 | 600 | 600 | |
5 μm | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | ||
*流動相 | 2.5 mM H2SO4 | H2O | H2O | H2O | H2O | ||
*流速 | 7.8x300 mm柱 | 0.4-0.8 | 0.4-0.8 | 0.4-0.8 | 0.4-0.8 | 0.4-0.8 | |
4.6x300 mm柱 | 0.1-0.30 | 0.1-0.30 | 0.1-0.30 | 0.1-0.30 | 0.1-0.30 | ||
zui高耐受溫度 (oC) | 85 | 85 | 85 | 85 | 85 |
(1) 對于7.8x300 mm柱在zui高溫度下而言,并扣除儀器的背壓。
(2) 對于固定相為5 μm的5%交聯(lián)度樹脂、規(guī)格為7.8x300 mm柱的流速是0.1 to 0.15 mL/min。
● 均勻*的粒徑確保了高分辨率和分離的高效性
● 交聯(lián)度:5%、8%和10%
● 與絕大多數(shù)水系流動相容(包括純水)
● 離子形態(tài)選擇范圍寬:H+、Ca2+、Pb2+、K+和Na+
● Carbomix H-NP柱的pH適用范圍為1~3,其他類型Carbomix柱的pH適用范圍為5~9
● 包括分析柱和制備柱
均一的粒徑
Carbomix 固定相粒徑分布極窄,5 µm為5.0±0.2 µm,10 µm為10.0 ± 0.2 µm。如此均一的粒徑分布確保了賽分產(chǎn)品具有高的分離效率和回收率。圖1表明,分離單糖試驗中,Carbomix Ca-NP5色譜柱比其他品牌產(chǎn)品具有更高的分離效率。
圖1. 相同分離條件下,在Carbomix Ca-NP5 (5 µm, 8%交聯(lián)度, 7.8 x 300 mm)柱和其它品牌相同規(guī)格鈣柱上分離6種單糖效果對比。
流動相: H2O
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不同離子態(tài)
Carbomix樹脂多種可選離子態(tài)使得賽分 Carbomix系列柱可廣泛用于各種不同基質(zhì)中糖分子、糖醇和其他水溶性物質(zhì)的優(yōu)質(zhì)分離。例如,樹膠醛糖、核糖醇、阿糖醇很難在H柱上分離,卻能在Ca 柱上實現(xiàn)*分離;木糖、半乳糖和甘露糖在Ca柱上是一個重疊峰,而在Pb柱上則能夠依次單獨流出。
不同離子態(tài)的選擇
離子 | 應用 |
H | 發(fā)酵產(chǎn)物、含有機酸的果汁、醇類和糖類 |
Ca | 含大量果糖的玉米糖漿中的糖類、尤其適用于單糖、二聚糖、三聚糖、四糖及糖醇的分離 |
Pb | 木制品中的戊糖和己糖 |
K | 蔗糖、蜜糖、玉米糖漿、甜菜糖及其他含有糖類植物產(chǎn)品(含有甜菜堿、*基氯化銨等兩性離子的) |
Na | 低聚糖,尤其在含有大量無機鈉離子的情況下,如蜂蜜。 |
低交聯(lián)度
Carbomix樹脂的低交聯(lián)度使其在流動相中可以適當 的溶脹,尤其在高溫條件下這是實現(xiàn)大多數(shù)分離任務(wù)的典型模式。這種溶脹可以優(yōu)化分離時的比表面積、滲透性、容量、選擇性,及改變離子強度。PS/DVB粒 子的交聯(lián)度越低,樹脂結(jié)構(gòu)就越開放,從而使更大分子量的多聚糖也有良好滲透性。圖2表明,在5% Carbomix Ca-NP5柱上,聚己糖(G6)可以很好的從基質(zhì)中分離,并且還能看到聚庚糖(G7)和聚辛糖(G8)的兩個峰得到了分離;而在8% Carbomix Ca-NP5上不但沒有G7和G8的峰,連G6的峰都不太明顯。
圖2. 不同交聯(lián)度Carbomix Ca-NP5 (5 µm, 7.8 x 300 mm)柱上麥芽糊精和甘油的流出曲線
色譜柱: Carbomix Ca-NP5
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優(yōu)異的穩(wěn)定性
Carbomix HPLC柱優(yōu)良的制造工藝和*的填裝技術(shù)保證了其具有高的穩(wěn)定性。即使是在升高溫度的條件下,Carbomix樹脂也能在純水和其他水緩沖體系中保持穩(wěn)定。圖3表明,55℃下,6天內(nèi)連續(xù)沖洗578倍柱體積,酸的保留時間僅改變了1%。
圖3. Carbomix H-NP5 (5 µm, 8%交聯(lián)度)柱55℃下連續(xù)用5 mM H2SO4沖洗后分離有機酸色譜圖
色譜柱: 4.6x 250 mm
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穩(wěn)定的批間重現(xiàn)性
由于采用了可控的表面化學修飾技術(shù)并嚴格監(jiān)控聚合物樹脂的生產(chǎn)過程,Carbomix柱具有很高的批間重現(xiàn)性。圖4表明,不同批次間的保留時間誤差在0.3%以內(nèi)。
圖4. 三個不同批次Carbomix H-NP10 (10 µm, 8%交聯(lián)度)柱分離有機酸色譜圖
色譜柱: 7.8x300 mm
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多種分離機理共同作用
Carbomix樹脂表面的抗衡離子(H+,Ca2+,Pb2+,K+和Na+) 能緩和分離過程。通常,分離的過程涉及兩種或兩種以上的機理同時作用,包括體積排阻、離子排斥、離子交換、配體交換、反相作用及正相作用。對多糖類樣品來 說,體積排阻機理是主要的作用機理,如圖4中寡聚糖的分離。而分離單糖時的主要機理則主要是配位效應,例如Ca型柱中分離葡萄糖的α、β-異構(gòu)體。在實現(xiàn) 蜂蜜樣品的分離過程中,首要的機理為離子排斥作用,該作用使得無機鈉離子通過孔隙被洗脫下來。而體積排阻和配體交換作用則依次作用于寡聚糖和單糖的分離。 對于分離有機酸用的Carbomix H型樹脂來說,反相作用和離子排阻作用均為首要機理。疏水性和pKa同時影響樣品組成的保留時間。這一特性使得Carbomix H型樹脂非常適合于監(jiān)測發(fā)酵過程中成分的變化。
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