MabPurix親和填料采用專有的表面鍵合技術(shù)，在4%高交聯(lián)度粒徑為45-165μm的瓊脂糖微球上鍵合分子量為46.7kD的重組Protein A 而制備得到。MabPurix Protein A親和填料專為重組蛋白質(zhì)和單克隆抗體的親和層析純化而設(shè)計(jì)。
MabPurix 不僅可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)、工藝開發(fā)、臨床應(yīng)用，還可以應(yīng)用于從幾毫克級(jí)到幾十千克級(jí)規(guī)模的蛋白質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)，這款填料是生產(chǎn)治療和診斷蛋白的純化工具。
技術(shù)指標(biāo)：
性質(zhì) | 數(shù)值 |
基質(zhì)組成 | 4%高交聯(lián)度瓊脂糖 |
功能基團(tuán) | 分子質(zhì)量為46.7kD的重組Protein A |
粒徑 | 45-165μm |
偶聯(lián)方式 | 專有（環(huán)氧偶聯(lián)） |
結(jié)合載量 | 靜態(tài)載量：40 mg人IgG /mL填料 |
耐堿腐蝕穩(wěn)定性（0.1 N NaOH） | 100個(gè)循環(huán) |
Protein A流失率 | 10ng/mg IgG |
*線性流速 | 30-300 cm/hr |
耐受溫度范圍 | 2-40℃ |
運(yùn)輸條件 | 室溫下運(yùn)輸，含18.5%乙醇的52%勻漿液 |
貯藏條件 | 2-8℃溫度下，并含抑菌劑（例如：18.5-20%乙醇） |
*pH工作范圍 | 3-10 |
在位清洗時(shí)的*pH值 | 2-11 |
再生 | 在每一次分離周期后，用3倍柱體積的0.1M檸檬酸緩沖液（pH=3.0）來再生樹脂床。 |
柱管參數(shù)
柱型號(hào) | 內(nèi)徑×高（mm×mm） | 柱體積（mL) | 接口 | *流速（mL/min） | zui大流速（mL/min） |
| 1 mL | 7.0×25 | 1.0 | 1/16" | 1 | 4 |
| 5 mL | 16×25 | 5.0 | 1/16" | 1-5 | 20 |
| zui大耐壓 | 30 bar (3 MPa) | ||||
| 化學(xué)穩(wěn)定性 | 柱子耐受緩沖鹽水溶液，1M堿性溶液，1M非氧化型有機(jī)酸，8M尿素，1M鹽酸胍，非鹵化有機(jī)溶劑和洗滌劑。不能耐受強(qiáng)氧化劑和鹵化溶劑。 | ||||
注：*預(yù)裝柱的材質(zhì)主要是由具有良好生物兼容性的聚丙烯構(gòu)成，過濾板是由10um多孔聚乙烯材質(zhì)構(gòu)成。
● 對(duì)單抗的高度結(jié)合力
● zui低的Protein A流失率
● 良好的耐堿腐蝕性
● *的耐蛋白酶降解能力
● 高批間重復(fù)性
● *的高蛋白質(zhì)回收率，并保持其生物活性
● 可忽略的非特異性作用
● 從研發(fā)到工業(yè)生產(chǎn)的廣泛的適用性
高動(dòng)載量：
圖一顯示了MabPurix同GE生產(chǎn)的MabSelect SuRe具有相似的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。
圖1.實(shí)驗(yàn)詳情：動(dòng)態(tài)載量以人多克隆抗體lgG的2%流穿測(cè)定，接觸時(shí)間為0.5-6分鐘，2mg/mL的hIgG磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）溶液上樣至一根5 x 50 mm的層析柱上。
耐堿腐蝕穩(wěn)定性測(cè)試：
MabPurix在使用低濃度NaOH清洗和消毒時(shí)，動(dòng)態(tài)載量會(huì)隨著接觸時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)微弱的降低（如圖2示）。接觸時(shí)間為25h代表使用0.1 N NaOH進(jìn)行了100次每次15分鐘的在位清洗。
圖2 人多克隆抗體IgG在0.1 N NaOH暴露后測(cè)定殘余動(dòng)態(tài)載量。在5 x 50 mm的層析柱中上樣2mg/mL hIgG的磷酸鹽緩沖溶液（pH=7.4）。上樣接觸時(shí)間是3分鐘。載量以2%流穿測(cè)定。每次洗脫柱子之前都要在0.1 N NaOH中接觸5h。
工藝穩(wěn)定性測(cè)試：
蛋白酶耐受性對(duì)于結(jié)合活性的保持和降低配體流失率非常重要。通過改進(jìn)的接枝技術(shù)，MabPurix在長(zhǎng)時(shí)蛋白酶穩(wěn)定性方面下表現(xiàn)出優(yōu)于MabSelect SuRe的蛋白酶穩(wěn)定性。如圖3所示：在3h的暴露時(shí)間后，MabPurix仍保留了85%的載量能力。
圖3 以胰凝乳蛋白作為模型因子來評(píng)價(jià)MabPurix對(duì)蛋白酶誘導(dǎo)降解的耐受能力。31h的接觸周期，在每一周期后測(cè)定靜態(tài)載量。
MabPurix——zui低脫落的填料
蛋白酶和堿性條件，不論在過程或者配體本身都會(huì)產(chǎn)生一定程度的退化，表現(xiàn)為Protein A從親和樹脂上的脫落是固定化化學(xué)或配體本身的蛋白酶或腐蝕降解的自然結(jié)果，通過改進(jìn)的鍵合技術(shù)使得普遍性降低了Protein A的流失率，如圖4所示。
圖4 實(shí)驗(yàn)詳情：在每一次柱周期中監(jiān)測(cè)hIgG的載量，在周期之間進(jìn)行在位清洗（0.1 N NaOH，接觸時(shí)間：15分鐘），被污染的Protein A采用商用ELISA試劑盒在產(chǎn)品接收池中檢測(cè)。
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