降鈣素基因相關(guān)肽一抗宿主物種的選擇一般說(shuō)來(lái),在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí),一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要,對(duì)于免疫組化而言,盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗,從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng),例如:檢測(cè)小鼠樣本蛋白,則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗,選兔源的一抗,則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子(酶、熒光素、等)的抗兔IgG。
如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況,除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法,則抗體宿主物種的影響不大,如對(duì)不含IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的western blotting檢測(cè),盡管如此,含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白,還原變性樣本中含IgG,在western blot 檢測(cè)中則結(jié)合出現(xiàn)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
二抗的選擇 二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源,例如:如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建議檢查二抗說(shuō)明書(shū)確保該抗體適用于你的檢測(cè)應(yīng)用, 二抗一般連接熒光素FITC 或發(fā)光團(tuán)。
上海谷研生物科技有限公司特殊抗體的保存條件:
. 酶聯(lián)抗體:永遠(yuǎn)保存在4 度,避免凍起來(lái)。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失
2. 偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體,對(duì)
光極為敏感,因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的!
3. IgG3 的同型對(duì)照:永遠(yuǎn)保存在4 度,避免凍起來(lái)。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過(guò)程,該抗體非常
容易形成多聚體無(wú)論是保存還是運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融!
反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力!
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關(guān)于加入甘油保存:有些人會(huì)加50%的甘油到抗體中來(lái)避免反復(fù)凍融,甘油在-20 度 會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。但是abcam 僅對(duì)非常小的一部分抗體檢測(cè)過(guò)其在這種條件下的穩(wěn)定性;而abcam 只對(duì)按照條件保存的抗體提供質(zhì)量保證!加入甘油的溶液不建議在-80 度保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過(guò)了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來(lái)保存抗體的話,請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無(wú)菌操作,避免污染!
關(guān)于蛋白保護(hù)劑:
蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解( mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來(lái)標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。
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