P388D(淋巴瘤細(xì)胞) 具體操作
取出凍存管: 根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤:水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:將水浴鍋預(yù)熱至37℃
P388D(淋巴瘤細(xì)胞) 用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶 等。
迅速解凍:
迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化。
.約-2min后
凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
制備細(xì)胞懸液:吸棄上清液。
向離心管內(nèi)加入0ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
活化與細(xì)胞復(fù)蘇 收到細(xì)胞株包裹時(shí), 請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。
細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-96℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。
細(xì)胞計(jì)數(shù):細(xì)胞濃度以5×05/ml為宜。
培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)(或者24-48小時(shí))后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
公司其他銷量大產(chǎn)品信息:409 3%NaCl 乳糖 ml×0 支/盒
40 0%氯化鈉胰胨水 ml×0 支/盒
4 氧化酶試紙 0 片/瓶
4 3%NaCl ml×0 支/盒
43 3%NaCl V-P 半固體瓊脂 ml×0 支/盒
44 3%NaCl 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn) ml×0 支/盒 生化試驗(yàn),接種后每支滴加00~300ul 0303 覆蓋
45 3%NaCl 氨基酸脫羧酶對(duì)照 ml×0 支/盒
46 3%NaCl 脫羧酶試驗(yàn) ml×0 支/盒
47 3%NaCl 脫羧酶試驗(yàn) ml×0 支/盒
48 賴氨酸脫羧酶氯化鈉肉湯(LDC) ml×0 支/盒 生化試驗(yàn),含 %NaCl,接種后每支滴加 mll 0303 覆蓋
49 脫羧酶氯化鈉肉湯(ODC) ml×0 支/盒
40 雙水解酶氯化鈉肉湯(ADH) ml×0 支/盒
4 無菌液體石蠟 ml×0 支/盒
4 3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂斜面(限供汽運(yùn)) 0m×0 支/箱 用于副溶血性弧菌血清試驗(yàn)
鄰硝基ben"-β-D-吡喃葡萄糖苷,-硝基ben"-β-D-吡喃葡萄糖苷,ONPG
鄰硝基ben"-α-D-吡喃葡萄糖苷,-硝基ben"-α-D-吡喃葡萄糖苷,ONPG
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