人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)0分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。
小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少ClassⅡ)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
定期檢測(cè)下列項(xiàng)目:5.CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,每周更換)。5.3.無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之airflow壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000小時(shí)/HEPA)。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin:750),定期更換水槽的水
粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過(guò)個(gè)月,如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些,但也不要超過(guò)3-4個(gè)月,可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高,細(xì)胞嬌弱,放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
開(kāi)紫外線照射臺(tái)的時(shí)候,就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來(lái)了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后,找個(gè)毛巾擦干上面的水。
細(xì)胞 停滯期(Stagnate phase) 細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后,如不及時(shí)進(jìn)行傳代,細(xì)胞就會(huì)停止增殖,進(jìn)入停止期。此時(shí)細(xì)胞數(shù)持平,故也稱平臺(tái)期(Plateau phase)。停滯期細(xì)胞雖不增殖,但仍有代謝活動(dòng)。如不進(jìn)行分離傳代,細(xì)胞會(huì)因培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒,出現(xiàn)形態(tài)改變,貼壁細(xì)胞會(huì)脫落,嚴(yán)重的會(huì)發(fā)生死亡,因此,應(yīng)及時(shí)傳代。
公司更多產(chǎn)品信息:0903 KF 鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基 000ml/瓶 含 TTC,用于糞鏈球菌濾膜計(jì)數(shù)
0706 3% ml×0 支/盒 用于過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)
"SN/T 0477—95 B 群鏈球菌檢驗(yàn)"
09 牛心湯培養(yǎng)基 50g/瓶 用于鏈球菌增菌
093 選擇性牛心湯增菌培養(yǎng)基 50g/瓶 用于鏈球菌選擇性增菌
094 牛心湯瓊脂 50g/瓶 用于綿羊血瓊脂平板制備
095 Todd-Hewitt 肉湯 50g/瓶 用于 β-溶血素制備
00 革蘭氏染色液 0ml×4 支/盒 用于細(xì)菌的革蘭氏染色
"SN/T 933—007 腸球菌檢驗(yàn)"
030 緩沖蛋白胨水(BPW) 50g/瓶 用于細(xì)菌增菌
3005 無(wú)菌生理鹽水 9ml×0 支/箱 含 0.85%NaCl,用于樣品稀釋
0903 KF 鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基 000ml/瓶 含 TTC,用于糞鏈球菌濾膜計(jì)數(shù)
090 腸球菌瓊脂(膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂) 50g/瓶 用于腸球菌計(jì)數(shù)
0909 膽汁七葉苷瓊脂 50g/瓶 用于腸球菌確證
0904 腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基 50g/瓶 用于確證試驗(yàn)
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