腹水瘤細胞具體操作
取出凍存管: 根據(jù)細胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細胞的編號。
從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
初學(xué)者易犯錯誤:水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。
離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機損壞和細胞丟失。
一次復(fù)蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細胞交叉污染。
實驗前準備:將水浴鍋預(yù)熱至37℃
腹水瘤細胞用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶 等。
迅速解凍:
迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
.約-2min后
凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min
制備細胞懸液:吸棄上清液。
向離心管內(nèi)加入0ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。
活化與細胞復(fù)蘇 收到細胞株包裹時, 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。
細胞復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-96℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。
細胞計數(shù):細胞濃度以5×05/ml為宜。
培養(yǎng)細胞將復(fù)合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞情況而定。
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