人角膜上皮細(xì)胞細(xì)胞潛伏期(latent phase):細(xì)胞接種后,先經(jīng)過(guò)一個(gè)在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時(shí),細(xì)胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形.然后細(xì)胞貼附于載體表面,稱(chēng)貼壁,懸浮期結(jié)束. 細(xì)胞貼壁速度與細(xì)胞種類(lèi),培養(yǎng)基成分,載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下,原代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁速度慢,可達(dá)0-24 小時(shí)或更多,而傳代細(xì)胞系貼壁速度快,通常0-30 分鐘即可貼壁。細(xì)胞貼壁后還需經(jīng)過(guò)一個(gè)潛伏階段,才進(jìn)入生長(zhǎng)和增殖期.原代培養(yǎng)細(xì)胞潛伏期,約24-96 小時(shí)或更長(zhǎng),連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期短,僅需6-24 小時(shí)。
細(xì)胞指數(shù)增生期(logarithmic growth phase) 這是細(xì)胞增殖zui旺盛的階段,分裂相細(xì)胞增多。指數(shù)增生期細(xì)胞分裂相數(shù)量可作為判定細(xì)胞生長(zhǎng)是否旺盛的一個(gè)重要標(biāo)志。通常以細(xì)胞分裂相指數(shù)(Mitotic index,MI)表示,即細(xì)胞群中每000 個(gè)細(xì)胞中的分裂相數(shù)。一般細(xì)胞的分裂指數(shù)介于0.%-0.5%,原 代細(xì)胞分裂指數(shù)較低,而連續(xù)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分裂相指數(shù)可高達(dá)3%-5%。人角膜上皮細(xì)胞指數(shù)增生期的細(xì)胞是細(xì)胞活力時(shí)期,是進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)*時(shí)期,也是凍存細(xì)胞的時(shí)機(jī)。在接種細(xì)胞數(shù)量適宜情況下,指數(shù)增生期持續(xù)3-5 天后,隨著細(xì)胞數(shù)量不斷增多、生長(zhǎng)空間減少,zui后細(xì)胞相互接觸匯合成片。
正常細(xì)胞相互接觸后能抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng),這種現(xiàn)象稱(chēng)接觸抑制現(xiàn)象(contact inhibition)。而惡性腫瘤細(xì)胞無(wú)接觸抑制現(xiàn)象,能繼續(xù)移動(dòng)和增殖,導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展,使細(xì)胞發(fā)生堆積(piled up)。細(xì)胞接觸匯合成片后,雖然發(fā)生接觸抑制,但只要營(yíng)養(yǎng)充分,細(xì)胞仍能進(jìn)行增殖分裂,因此細(xì)胞數(shù)仍然在增多。但是,當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大,培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多時(shí),細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響,導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止,這種現(xiàn)象稱(chēng)密度抑制現(xiàn)象(Density Inhibition)。
培養(yǎng)細(xì)胞注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)0分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)0分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。
小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少ClassⅡ)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
公司其他類(lèi)型產(chǎn)品信息:40 EB 肉湯增菌液添加劑 ml×0 支/盒 每支用于 5ml4 中
00 革蘭氏染色液 0ml×4 支/盒 用于細(xì)菌革蘭氏染色
0706 3% ml×0 支/盒 用于過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)
405 血瓊脂基礎(chǔ) 50g/瓶 用于細(xì)菌溶血反應(yīng)
5070 無(wú)菌脫纖維綿羊血 00ml/瓶
340 血瓊脂平板 90mm×0 個(gè)/包 用于細(xì)菌溶血反應(yīng)
406 SIM 動(dòng)力培養(yǎng)基 50g/瓶 用于細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)
406 SIM 動(dòng)力試驗(yàn)管 .5ml×0 支/盒 用于細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)
06 硝酸鹽肉湯 50g/瓶 用于硝酸鹽還原試驗(yàn)
30 無(wú)菌硝酸鹽肉湯 5ml×0 支/盒 用于硝酸鹽還原試驗(yàn)
003 硝酸鹽還原試劑 0ml×4 支/盒 用于硝酸鹽還原試驗(yàn)
0604 緩沖葡萄糖蛋白胨水 ml×0 支/盒 用于 MR 和 VP 試驗(yàn)
0605 甲基紅試劑 0ml×4 支/盒 用于 MR 試驗(yàn)
053 V-P 試劑 0ml×4 支/盒 用于 VP 試驗(yàn)
03 發(fā)酵管 ml×0 支/盒
0606 鼠李糖發(fā)酵管 ml×0 支/盒
03 葡萄糖發(fā)酵管 ml×0 支/盒
404 麥芽糖發(fā)酵管 ml×0 支/盒
405 木糖發(fā)酵管 ml×0 支/盒
0407 七葉苷發(fā)酵管 ml×0 支/盒
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